[发明专利]利用发酵法生产目的物质的方法

权利要求书

1.一种利用微生物来生产目的物质的方法，其包括在培养基中培养微生物，从而在该培养基中生成并蓄积L-氨基酸或核酸，并从该培养物中收集目的物质，其特征在于，所述微生物被赋予了异麦芽糖酶活性，或者经过修饰而增加了异麦芽糖酶活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该微生物进一步被赋予了将异麦芽糖摄入细胞内的活性，或者经过修饰而增加了该活性。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述微生物进一步被赋予了麦芽糖酶活性，或者经过修饰而增加了麦芽糖酶活性。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述微生物进一步被赋予了麦芽糖摄入活性，或者经过修饰而增加了该活性。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，所述培养基包含异麦芽糖，或者包含异麦芽糖和麦芽糖。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其特征在于，所述微生物中导入了编码芽孢杆菌属(Bacillus)细菌的异麦芽糖酶的基因。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述异麦芽糖酶为下述(A)或(B)所示的蛋白质：

(A)由SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(B)由在SEQ ID NO：14中取代、缺失、插入或添加一个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列组成，且具有异麦芽糖酶活性的蛋白质。

8.根据权利要求6所述的方法，其中，所述异麦芽糖酶由下述(a)或(b)的DNA编码：

(a)具有SEQ ID NO：13所示的碱基序列的DNA；

(b)与SEQ ID NO：13所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，且编码具有异麦芽糖酶活性的蛋白质的DNA。

9.根据权利要求6所述的方法，其中，所述异麦芽糖酶为下述(C)或(D)所示的蛋白质：

(C)由SEQ ID NO：40所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(D)由在SEQ ID NO：40中取代、缺失、插入或添加一个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列组成，且具有异麦芽糖酶活性的蛋白质。

10.根据权利要求6所述的方法，其中，所述异麦芽糖酶由下述(c)或(d)的DNA编码：

(c)具有SEQ ID NO：39所示的碱基序列的DNA；

(d)与SEQ ID NO：39所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，且编码具有异麦芽糖酶活性的蛋白质的DNA。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，其特征在于，所述微生物中导入了编码芽孢杆菌属细菌的PTS麦芽糖酶IICB的基因。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述PTS麦芽糖酶IICB是下述(E)或(F)所示的蛋白质：

(E)由SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(F)由在SEQ ID NO：42中取代、缺失、插入或添加一个或数个氨基酸而得到的氨基酸序列组成，且具有将异麦芽糖摄入细胞内的活性的蛋白质。

13.根据权利要求11所述的方法，其中，所述PTS麦芽糖酶IICB由下述(e)或(f)所示的DNA编码：

(e)具有SEQ ID NO：41所示的碱基序列的DNA；

(f)与SEQ ID NO：41所示的碱基序列的互补序列或与能够由该碱基序列制备的探针在严格条件下杂交，且编码具有将异麦芽糖摄入细胞内的活性的蛋白质的DNA。

14.根据权利要求1～13中任一项所述的方法，其中，所述微生物是肠杆菌科(Enterobacteriaceae)细菌。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述微生物为埃希氏菌属(Escherichia)细菌。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述埃希氏菌属细菌为大肠杆菌(Escherichia coli)。

17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述氨基酸选自L-赖氨酸、L-苏氨酸和L-苯丙氨酸。