[实用新型]细胞克隆分离装置

说明书

技术领域

本实用新型属于细胞培养技术领域，具体涉及一种细胞克隆分离装置。

背景技术

随着生物高科技术的飞速发展，从真核细胞基因转染、单克隆工程、细胞株分离、胚胎工程到干细胞技术，都离不开细胞克隆，从众多的细胞中提取阳性细胞克隆(单个细胞无性生殖形成的生物性状完全一致的细胞群)。传统方式是将细胞培养皿中的培养液弃掉，迅速用玻璃吸管吸取少量胰酶，将贴壁生长的细胞或细胞团消化脱离细胞培养皿，挑取出细胞或细胞团。在通常一个细胞培养容器内有若干细胞的情况下，极易因消化液体扩散，造成细胞之间交叉污染，使提取的细胞中含有不需要的细胞，导致不能成功地提取克隆细胞。另外，胰酶消化细胞需要一定时间，其他细胞或细胞团在无培养液体状态下的细胞会很快死亡。故传统提取克隆细胞的方式，操作繁杂，克隆细胞的回收率极低。

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种细胞克隆分离装置，以解决传统提取克隆细胞的方式的不足。

为此，本实用新型提供了一种细胞克隆分离装置，其特征在于其主体中空且上、下均设有开口端，其侧壁为封闭状，下开口端为能与细胞培养皿密封贴合的平面，其主体高度略低于标准培养皿的深度。

在一些实施方式中，所述主体可为方形、圆柱形或椭圆形中之一，优选为圆柱形，其内径大小为0.5-5cm，最优选其内径要恰巧将一个细胞克隆圈进，且不与邻近克隆接触。

在一实施方式中，所述主体为圆柱形时，其上开口端的直径小于下开口端的直径，以有利于细胞克隆分离装置的稳固性。

在一实施方式中，所述主体为圆柱形时，其上开口端的直径大于下开口端的直径，以便于细胞克隆分离时操作者进行加液操作。

在一实施方式中，所述主体为圆柱形，其上开口端的直径大于下开口端的直径时，所述主体还具有至少3个支撑稳定结构等间距固定于侧壁外侧，其中所述支撑稳定结构可为方块形、圆球形或三角形。

在一些实施方式中，所述主体下开口端还可外包一层韧性材料层，所述韧性材料为可耐受无菌处理无细胞毒性的橡胶、塑料或树脂，以加强下开口端与细胞培养皿密封贴合，减少装置内腔的液体外露。

本实用新型所述装置结构简单、使用方便，细胞克隆的回收率高，并避免细胞克隆间的交叉混杂或污染。

附图说明

图1为一优选实施例中细胞克隆分离装置结构正面示意图。

图2为一优选实施例中细胞克隆分离装置结构侧面示意图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本实用新型作进一步详述。

一种细胞克隆分离装置，其主体为圆柱形，中空且上、下均设有开口端1a、1c，其上开口端1a的直径大于下开口端1c的直径，其侧壁1b为封闭状，下开口端1c为能与细胞培养皿密封贴合的平面，3个三角形支撑稳定结构2等间距固定于侧壁1b外侧，所述主体下开口端1c外包一层橡胶层3，其主体高度略低于标准培养皿的深度。

本实施例中细胞克隆分离装置简称克隆杯。

“克隆杯”从原代羊水分离干细胞的过程：

1实验材料：克隆杯、医用凡士林、PBS平衡盐溶液，0.25％Trypsin-EDTA，0.2％明胶溶液(PBS平衡盐溶液配制)、玻璃培养皿、弯镊子、24孔培养板、200ul、1000ul Tip枪头等。以上均消毒灭菌，并将医用凡士林置于玻璃培养皿中备用。

2“克隆杯”分离法过程：

1)取已形成细胞克隆的60mm培养皿，倒置显微镜下观察，并用标记笔将性状良好的细胞克隆在培养皿底部对侧圈标记号。

2)将培养皿移入超净台，用1000ul Tip枪头吸去培养液，用3ml无菌PBS平衡盐溶液轻轻漂洗，尽量洗去残余培养液，弃平衡盐溶液。再向培养皿内加入2ml无菌PBS平衡盐溶液。

3)用无菌的弯镊子取一个克隆杯，将克隆杯底部轻轻压到医用凡士林上，使凡士林均匀涂至克隆杯的底部。然后将涂有凡士林的克隆杯准确放到标记好的克隆上，将细胞克隆隔离。

4)用200ul Tip枪头吸去克隆杯内的PBS平衡盐溶液，加入预热至37℃的0.25％Trypsin-EDTA 30-50ul，缓慢移至倒置相差显微镜下观察，见细胞突起缩回，细胞间隙增加，细胞近乎缩成圆形，部分悬浮时加入适量培养液(以不溢出克隆杯为准)终止消化。用200ul Tip枪头在克隆杯内轻轻吹打皿底，尽量使细胞完全脱离皿底。将细胞悬液移入预先0.2％明胶溶液包被的24孔板的一个孔内。再用新鲜培养液洗杯内剩余细胞，合并放入同一孔内。

5)重复3)、4)步骤挑选其余克隆。上述整个操作过程务必保证克隆杯固定。