[实用新型]检测庆大霉素的免疫胶体金试剂板

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种检测抗生素残留免疫胶体金试剂板，具体涉及一种检测乳制品中庆大霉素药物残留的免疫胶体金试剂板。

背景技术

庆大霉素属于氨基糖苷类抗生素，主要作用于革兰氏阴性细菌，由于其抗菌谱广、疗效佳、价格低廉而广泛应用于兽医临床和动物饲料添加剂。但是庆大霉素在应用过程中易产生毒副作用，大剂量不规范使用导致动物性食品中的药物残留超标会对人体健康造成严重危害，产生肾毒性，耳毒性，肌肉阻滞，过敏反应等一系列毒副作用。我国农业部第235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》中规定庆大霉素在乳制品中的残留限量标准为100ng/mL。

目前，对于庆大霉素药物残留的检测方法主要有理化分析法和免疫分析法。理化分析法常用的有高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱/质谱联用分析法(LC-MS)，特异性好、准确率高，是各大检测机构对检测样本进行确证的首选方法。但理化分析法存在对设备、环境、操作技能等要求，不利于大规模样本筛选，因而不适用于广大基层部门。免疫分析法常用的有酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫层析法(GICA)，ELISA法检测量大，操作相对简单，越来越多地被用于动物性食品中抗生素残留的检测，但是整个操作仍需要1-2h，且需用到特殊仪器设备，具有一定局限性。GICA法灵敏、快速、特异、简便，近年来倍受国内外学者关注，是今后庆大霉素残留快速检测的发展方向。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种灵敏度高，特异性好，简便快速，生产成本低的庆大霉素免疫胶体金试剂板。

本实用新型试剂板由上下两块塑料模板、背衬及粘附在背衬上依次紧密相连的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫组成。

其中样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫相邻各部分间有1-2mm的重叠，其目的一方面是保证层析作用从样品垫到吸水垫部位顺利进行，另一方面是为了使样品溶液与样品垫有充分反应时间，样品垫上的缓冲体系可以中和样品溶液的酸碱度，保证样品溶液中的有效成分与胶体金结合垫上的金标抗体顺利发生反应。

胶体金结合垫上包被有抗庆大霉素单克隆抗体与胶体金的结合物；硝酸纤维素膜上从样品垫到吸水垫方向依次包被有庆大霉素-载体蛋白偶联物和羊抗鼠IgG，分别作为检测线和质控线。偶联庆大霉素的载体蛋白可为牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、血蓝蛋白(KLH)等。抗庆大霉素单克隆抗体为可以识别庆大霉素的免疫球蛋白或其片段。

本实用新型试剂板的各部分组成成分与功能如下：

塑料模板，起固定试纸条及标示功能区(加样孔、检测区、控制区)的作用

背衬为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸其他组成部分的作用。

样品垫由玻璃纤维制成，起吸收样品溶液与缓冲样品溶液pH值的作用。

胶体金结合垫由聚酯膜制成，其上标记有抗庆大霉素单克隆抗体与胶体金的结合物，是样品溶液中的有效成分与金标抗体发生反应的场所。

硝酸纤维素膜部分主要作用是将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。

吸水垫为滤纸，作为吸水部分其作用是将移动上来的多余的溶液吸收。

本实用新型试剂板具有如下有益效果：

(1)特异性好。本实用新型试剂板对庆大霉素的交叉反应率为100％，对其他种类的抗生素包括链霉素、双氢链霉素、新霉素的交叉反应率均低于1％，可见，本实用新型试剂板对庆大霉素有高度专一性。

(2)灵敏度高。本实用新型试剂板对原奶中庆大霉素的检出限为50ppb(ng/mL)，可以满足我国农业部第235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》中对庆大霉素在乳制品中最高残留限量100ng/mL的规定要求。

(3)操作简单快捷，不依赖任何实验设备，不需任何专业培训。本实用新型试剂板将反应所需的大部分原料整合到试剂条中，滴样后抗原抗体反应在固相膜上快速进行，大大缩短了检样时间，且样品无需特殊处理，5-10分钟内即可用肉眼通过判断硝酸纤维素膜上的检测线和质控线的颜色深浅读取结果，检测过程无需特殊仪器辅助，普通人员均可操作，不需要专业培训，极易推广使用。

(4)成本低，效益好。本实用新型试剂板生产工艺成熟、流程简单，生产成本低廉，投资少，收效快。

附图说明

图1为庆大霉素免疫胶体金快速检测试剂板结构示意图，其中1为样品垫，2为胶体金结合垫，3为硝酸纤维素膜，4为检测线，5为控制线，6为吸水垫，7为不干胶，8为PVC板。