[实用新型]四环素免疫胶体金快速检测试剂板

说明书

技术领域

本实用新型属于兽药残留免疫化学快速检测技术领域，具体涉及一种检测试剂板。

背景技术

四环素是由链霉菌产生的一种广谱抗生素，在畜禽、水生生物等产业领域应用此类药物对动物进行诊断、预防和治疗疾病，以及促进动物生长、提高饲料转化率，带来了可观的经济效益。但是，长期食用这种动物食品及其制品，必然会危及人类的健康。四环素药物的毒性反应主要表现在对胃、肠、肝脏的损害，以及牙齿的染色，还会造成过敏反应、二重感染、致畸胎作用。目前，四环素造成的动物性食品的药物残留，已经对人类健康构成了潜在的危害。欧美、日本及中国均要求其限量使用。

目前，食品中四环素残留常用的检测方法主要是仪器法和免疫分析法。仪器法，如高效液相色谱法(HPLC)、液-质联用(LC-MS)等，具有特异性好、准确率高的特点，但由于存在对设备、环境、操作技能等要求，且检测周期长，不利于大规模样本筛选。免疫分析法，如酶联免疫吸附法(ELISA)，具有检测量大，操作相对简单等优点，但是该法同样需要实验室设备，分析时间较长，具有一定局限性。

实用新型内容

本实用新型的目的在于针对上述方法的不足，提供一种灵敏度高、操作简单、检测时间短、不需要特殊仪器设备、生产成本低的牛奶中四环素残留检测试剂板。

本实用新型试剂板由塑料模板上下板、背衬及粘附在背衬上依次紧密相连的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫组成。其中样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫相邻各部分间有1-2mm的重叠，其目的一方面是保证层析作用从样品垫到吸水垫部位顺利进行，另一方面是为了使样品溶液与样品垫有充分反应时间，样品垫上的缓冲体系可以中和样品溶液的酸碱度，保证样品溶液中的有效成分与胶体金结合垫上的金标抗体顺利发生反应。

胶体金结合垫上包被有抗四环素单克隆抗体与胶体金的结合物；硝酸纤维素膜上从样品垫到吸水垫方向依次包被有四环素-载体蛋白偶联物和羊抗鼠IgG，分别作为检测线和质控线。偶联四环素的载体蛋白可为牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、血蓝蛋白(KLH)等。

本实用新型所描述的试剂板的各部分组成成分与功能如下：

塑料模板，起固定试纸条及标示功能区(加样孔、检测区、控制区)的作用

背衬为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸其他组成部分的作用。

样品垫由玻璃纤维制成，起吸收样品溶液与缓冲样品溶液pH值的作用。

胶体金结合垫由聚酯膜制成，其上标记有抗四环素单克隆抗体与胶体金的结合物，是样品溶液中的有效成分与金标抗体发生反应的场所。

硝酸纤维素膜部分主要作用是将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。

吸水垫为滤纸，作为吸水部分其作用是将移动上来的多余的溶液吸收。

本实用新型试纸板具有如下有益效果：

(1)特异性好。本实用新型试剂板的抗四环素单克隆抗体除对四环素的交叉反应率为100％外，对四环素类药物中的土霉素、金霉素的交叉反应率分别为69％和62％，因此本实用新型可以同时检测牛奶中多种四环素类药物残留。此外，本实用新型试剂对氯霉素、链霉素、庆大霉素、青霉素、磺胺类等其他种类抗生素药物无交叉反应。

(2)灵敏度高。我国国家标准规定牛奶中四环素残留限量为100μg/kg。本实用新型试剂板的灵敏度可达到四环素标准品5μg/kg、土霉素标准品7μg/kg、金霉素标准品8μg/kg，用于检测牛奶中的四环素类残留，最低检测限可达到四环素10μg/kg、土霉素15μg/kg、金霉素16μg/kg。

(3)操作简便快速。本实用新型将免疫层析反应所需的大部分原料已整合到试剂条中，滴样后抗原抗体反应在固相膜上快速进行，大大缩短了检样时间，且样品无需处理，滴样后3～5分钟内读取结果，使得整个检测过程仅需5分钟左右。本方法不需任何专业培训，普通人员均可操作，只需按说明滴样后用肉眼判读即可。

(4)不依赖于实验设备。本实用新型在直接滴样跑板后，通过肉眼判断硝酸纤维素膜上检测线和控制线的颜色深浅对比来判读结果，整个检测过程无需用到任何实验设备，真正做到了对实验设备零要求的目标，尤其适合于野外及现场操作，易于推广使用。

(5)成本低，效益好。本实用新型试剂板生产工艺流程简单，生产成本低廉，投资少，见效快。

附图说明