[发明专利]真菌免疫调节蛋白基因启动子、重组载体及宿主细胞

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因工程技术领域的基因启动子、重组载体及宿主细胞，具体是一种真 菌免疫调节蛋白基因启动子、重组载体及宿主细胞。

背景技术

金针菇(Flammulina velutipes)，学名毛柄金钱菌，属伞菌目(Agaricales)，口蘑 科(Tricholomataceae)，金针菇属(Flammulina)。金针菇(Flammulina velutipes)分布 广泛。金针菇除了味道鲜美，具有极高的营养价值外，还含有多种药用成分，是一种重要的 药用资源。金针菇中含有多种生物活性物质，如火菇素(Flammulin)，溶细胞素 (Flammutoxin)，真菌免疫调节蛋白(FIP-fve)，抗病毒蛋白，跨上皮电抗性蛋白 (TEER-TDP)和金针菇多糖(FVP)(金湘，娄恺，毛培宏.金针菇生物活性物质结构与功能的 研究进展.中草药.2007，38(10)：1596，I0001，I0002)。其中，真菌免疫调节蛋白是近 年来研究的比较多的一种重要的生物活性物质。

真菌免疫调节蛋白是从一些高等担子菌(蘑菇类)子实体中提取的与植物凝集素和免疫 球蛋白的结构和免疫功能相似的一类小分子蛋白质。自1989年日本学者Kino等从赤灵芝 (Ganoderma lucidium)子实体中分离提取出第一个真菌免疫调节蛋白(LZ-8)以来，已分 别从松杉灵芝(G.tsugae)，金针菇(Flammulina velutipes)，草菇(Volvariella volvacea)，紫芝(G.japoncium)，小孢灵芝(G.microsporum)及紫芝(G.sinense)分 离得到了七种FIP，即LZ-8(FIP-glu)，FIP-gts，FIP-fve，FIP-vvo，FIP-gja，FIP-gmi， FIP-gsi，形成了一个新的蛋白质家族朏IPs。在真菌免疫调节蛋白家族中，其一级结构有着 60～70％的同源性。该家族的蛋白也同样具有相似的生理功能，对机体具有重要的免疫调节 功能。FIP能够促进人外周血淋巴细胞和小鼠脾细胞的有丝分裂；诱导淋巴细胞产生细胞因 子；减少抗原诱导型抗体的形成以及抑制非胖糖尿病小鼠的自身免疫。不同的真菌免疫调节 蛋白家族成员不仅在氨基酸序列上存在差异，在体内与体外也具有不同程度的免疫调节功能 。

Ko，J.L等在《European Journal of Biochemistry》(欧洲生化杂志)1995年第2期 244～249页发表了题为《A New Fungal Immunomodulatory Protein，FIP-fve Isolated from the Edible Mushroom，Flammulina velutipes and its Complete Amino Acid Sequence》(从食用真菌金针菇中分离得到了一种新的真菌免疫调节蛋白，FIP-fve，及其完 整的氨基酸序列)一文，文中评述，金针菇真菌免疫调节蛋白(FIP-Fve)在体外具有凝集 人红细胞的作用，能提高IL-2与干扰素γ的转录表达，可激活人外周血淋巴细胞，在体内也 能抑制过敏反应。利用基因工程重组表达的FIP-fve同样也具有相同的免疫调节功能。

在基因工程中常用的启动子按照其功能分为：组成型启动子，组织特异型启动子和诱导 型启动子。组成型启动子是指在该类启动子调控下，结构基因的表达基本恒定在一定水平上 ，并且在不同时期、不同组织及不同部位的表达水平没有明显差异。组织特异启动子是指在 这类启动子调控下，基因只在某些特定的器官或组织部位表达，并表现出发育调节的特性。 诱导型启动子是指在某些特定的物理或化学信号的刺激下，该启动子可以大幅度地提高基因 的转录表达水平。选择组织特异型启动子或诱导型启动子，对于利用基因工程手段改良物种 等方面具有重要意义。利用特异型或诱导型的启动子，可以使转化的目的基因在特异的部位 及特异的时期表达，从而达到真正的可控。对降低病虫害，减少转基因物种的危害性都具有 指导意义。

经对现有技术的文献检索发现，尚没有与本发明的真菌免疫调节蛋白基因启动子重、组 载体及宿主细胞有关的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种真菌免疫调节蛋白基因启动子、重 组载体及宿主细胞。本发明的金针菇真菌免疫调节蛋白基因启动子，可启动报告基因 GUS-GFP融合蛋白基因在烟草的根及叶表皮毛中高效表达。

本发明是通过以下技术方案实现的，