[发明专利]蛹虫草固体菌种培育方法

说明书

技术领域

       本发明涉及一种蛹虫草固体菌种培育方法。

背景技术

       虫草是一种珍稀的中药材，具有很高的药用和滋补功效。野生虫草资源有限，过量开采会破坏环境。人工培育的虫草，有效成分与野生虫草相近，部分成分甚至超过野生虫草，现在普遍采用人工培育蛹虫草的方法获取虫草。

       在蛹虫草的人工培育中，性能优良的菌种是蛹虫草高产和高质量的保证。因此，固体菌种的培育是蛹虫草人工培育中一个至关重要的环节。现在普遍采用的固体菌种培育方法是：接种完成后，在20～25℃恒温条件下，交替自然光照培养至孢子成熟。这样培育的蛹虫草固体菌种孢子较小，活性低，对杂菌的抵抗力差，由此蛹虫草固体菌种扩增的液体菌种，单位液体培养基中菌丝含量，活性一般，长期静置容易发生分层，接种时难以保证接种量的一致性，液体菌种接种到生产培养基后，菌落生长慢，转色所用时间长。

发明内容

       为了克服上述问题，本发明提供一种具有高活性和抗性的蛹虫草固体菌种培育方法。

       本发明所采取的技术方案是：

       蛹虫草固体菌种培育方法，其培育过程包括以下步骤：

1)        制备普通斜面固体培养基；

2)        接种蛹虫草菌种；

3)        暗激发培养：将接种好的菌种在23～25℃下遮光培养3天，将温度降低至20～23℃，继续遮光培养4天；

4)        光激发：将经过暗激发培养的菌种在自然散光下培养24小时，孢子成熟，完成蛹虫草固体菌种的培育；

其中，斜面固体培养基的配比为：

水：7500g   马铃薯：1400g    葡萄糖：180g       磷酸氢二钾：15g   硫酸镁：5g      蛋白胨：20g       蚕蛹粉：18g      琼脂粉：75g，或

水：9000g   马铃薯：1700g  葡萄糖：200g    磷酸氢二钾：20g     硫酸镁：7g 蛋白胨：26g      蚕蛹粉：20g       琼脂粉：90g，或

水：8500g   马铃薯：1650g  葡萄糖：195g    磷酸氢二钾：19g     硫酸镁：6.5g     蛋白胨：25g      蚕蛹粉：21g   琼脂粉：87.5g。

       本发明的有益效果是：与普通方法培育的蛹虫草固体菌种相比，经过暗激发培养的蛹虫草固体菌种气生菌丝更发达，菌苔更结实、肥厚，颜色鲜黄；孢子个体更大；气生菌丝粗大1.5倍以上，且分枝更多，不易断裂；菌种的活性高，对杂菌的抵抗力更强。使用经过暗激发培养的蛹虫草固体菌种扩增的液体菌种，单位液体培养基中菌丝含量更高，活性高，长期静置不易分层，静置120～140h没有出现分层现象，分布性好。使用该液体菌种接种量均匀，方便了液体菌种的使用。液体菌种接种到生产培养基后，菌落生长快，转色所用时间短，能缩短生产周期。

附图说明

       图1是实施例1和对照例1的气生菌丝对比图。

具体实施方式

       下面结合实例，进一步说明本发明。

       实施例1

选用的蛹虫草菌种为Cm001，购自中国农业大学生物学院食用菌研究室，培育过程包括以下步骤：

1)        制备普通斜面固体培养基，培养基的配比为： 水：7500g   马铃薯：1400g    葡萄糖：180g       磷酸氢二钾：15g   硫酸镁：5g      蛋白胨：20g       蚕蛹粉：18g      琼脂粉：75g，将配制好的培养基分装好，在121℃，压力1.05kg/cm²条件下灭菌40分钟，冷却至常温，备用； 

2)        接种：无菌条件下，在冷却至常温的培养基中接入Cm001菌种；

3)        暗激发培养：将接种好的菌种在23℃下遮光培养3天，将温度降低至20℃，继续遮光培养4天；

4)        光激发：将经过暗激发培养的菌种在自然散光下培养24小时，孢子成熟，完成蛹虫草固体菌种的培育。

       经检验，该蛹虫草固体菌种气生菌丝的平均直径为12~13μm，孢子的平均大小为6.5~7.5μm。