[发明专利]一种利用血清中的微小核糖核酸诊断肝癌的新技术

权利要求书

1.一种用于评价受试者肝癌检测标记物，其特征在于该检测标记物是在人体血清/血浆中稳定存在且可检测的成熟体微小核糖核酸的组合。

2.根据权利要求1所述的肝癌检测标记物，其特征在于所述血清/血浆取自受试者的活体、组织、器官和/或尸体。

3.根据权利要求1或2所述的肝癌检测标记物，其特征在于所述评价受试者的肝癌状态为测定受试者给予待测物后的肝癌状态。

4.根据权利要求1或2所述所述的肝癌检测标记物，其特征在于所述肝癌检测标记物用于筛选待测物的预防和/或治疗肝癌的活性。

5.根据权利要求1或2中所述所述的肝癌检测标记物，其特征在于所述评价受试者的肝癌状态为诊断和/或鉴别诊断受试者的肝癌。

6.根据权利要求1或2所述所述的肝癌检测标记物，其特征在于所述评价受试者的肝癌状态为评价对受试者的肝癌进行治疗的有效性。

7.根据权利要求1或2所述所述的肝癌检测标记物，其特征在于所述评价受试者的肝癌状态为对受试者发生肝癌进行预测。

8.根据权利要求1或2所述的肝癌检测标记物，其特征在于所述评价受试者的肝癌状态为对受试者肝癌并发症的发生和/或的复发进行预测。

9.根据权利要求7所述的肝癌检测标记物，其特征在于所述发生疾病为肝癌。

10.一种评价受试者的肝癌状态的方法，其特征在于，所述方法包括测定以下受试者的血清/血浆中稳定存在且可检测。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于所述血清/血浆来源于受试者活体、组织、器官和/或尸体。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其特征在于所述评价受试者的肝癌状态为测定受试者给予待测物后的肝癌状态。

13.根据权利要求10或11所述的方法，其特征在于所述方法用于筛选待测物的预防和/或治疗肝癌的活性。

14.根据权利要求10或11所述的方法，其特征在于所述评价受试者的肝癌状态为诊断和/或鉴别诊断受试者的肝癌。

15.根据权利要求10或11所述的方法，其特征在于所述评价受试者的肝癌状态为评价对受试者的肝癌进行治疗的有效性。

16.根据权利要求10或11所述的方法，其特征在于所述评价受试者的肝癌状态为对受试者发生肝癌进行预测。

17.根据权利要求10或11所述的方法，其特征在于所述评价受试者的肝癌状态为对受试者肝癌并发症的发生和/或复发进行预测。

18.根据权利要求10或11所述的方法，其特征在于所述测定受试者的血清/血浆中稳定存在且可检测的微小核糖核酸的方法选自：RT-PCR方法、Real-time PCR方法、Northern blotting方法、RNase protection assay、Solexa sequencing technology以及生物芯片方法中的一种或几种。

19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于所述RT-PCR方法包括以下步骤：

(1)提取受试者的血清/血浆总RNA，通过RNA逆转录反应得到cDNA样品；或者收集受试者的血清/血浆样本，以血清/血浆作为缓冲液进行逆转录反应来制备cDNA样品；

(2)用微小核糖核酸设计引物进行PCR反应；

(3)进行PCR产物的琼脂糖凝胶电泳；

(4)EB染色后在紫外灯下观察结果。

20.根据权利要求18所述的方法，其特征在于所述Real-time PCR方法包括以下步骤：

(1)提取受试者的血清/血浆总RNA，通过RNA逆转录反应得到cDNA样品；或者收集受试者的血清/血浆样本，以血清/血浆作为缓冲液进行逆转录反应来制备cDNA样品；

(2)用微小核糖核酸设计引物；

(3)加入荧光探针进行PCR反应；

(4)检测并比较血清/血浆样本相对于正常血清/血浆中微小核糖核酸的量的变化。