[发明专利]一种动物干扰素的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于动物医药领域，特别涉及一种制备动物干扰素的方法。

背景技术

鸡病毒性疾病仍是当前严重制约养鸡业健康发展的主要传染病。而传统的传染病治疗方案临床上有时难以凑效，尤其针对病毒病办法不多。鸡病毒性疾病至今尚无有效的治疗药物和治疗方法。近年来曾经有人进行过用中草药制剂预防和治疗鸡病毒性疾病的试验，但治愈率较低。抗生素及磺胺类药物基本无效。目前，鸡干扰素是治疗鸡病毒性疾病的有效药物。

存在的问题是：在鸡干扰素的生产中使用常规用鸡新城疫病毒(NDV)诱导鸡脾白细胞产生干扰素含量较低，但没有人用仙台病毒作为干扰素诱导剂。另外采集无菌鸡脾比较困难。

黄芪多糖是一种具有新型免疫调节作用物质，能刺激人体免疫系统的功能，诱生和促生干扰素产生，也是一种的鸡脾淋巴细胞调节素。黄芪多糖具有增强免疫力、抗肿瘤、抗病毒、抗放射、保肝、催眠等广泛的药理活性，能诱生与促诱生人血细胞产生干扰素-a(IFN-a)，干扰素-r(IFN-r)，鸡脾淋巴细胞介素-2(IL-2)，鸡脾淋巴细胞介素-6(IL-6)，肿瘤坏死因子-a(TNF-a)，与粒一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等多种细胞活性因子。黄芪多糖是一种新型的生物反应调节剂，具有间接抗病毒、抗肿瘤作用。

但有关利用仙台病毒和黄芪多糖作复合干扰素诱导剂高效制备干扰素的方法目前还未见报道。

因此，提供一种简单工艺方法生产含量高、制备成本低的高效生产动物干扰素的方法，是该技术领域科研人员急需开发的新课题之一。

发明内容

本发明的目的在于克服上述技术中的不足之处，提供一种动物干扰素的制备方法。

为实现上述目的本发明所采用的技术方案如下：

一种动物干扰素的制备方法，具体实施步骤如下：

(1)无菌采取实验鸡脾脏，用脾脏制备淋巴细胞悬液，加入10μg/ml卡那霉素，用配置好的培养液稀释淋巴细胞悬液，使鸡脾淋巴细胞浓度稀释为每ml含1×10⁵-1×10⁷；；

(2)对淋巴细胞单层进行传代培养；

(3)鸡脾淋巴细胞中加入少量干扰素，使其最终浓度为100-1000IU/ml，于37℃水浴培养0.5-2小时；

(4)再加入黄芪多糖，使其最终浓度为25-100μg/ml，于37℃水浴培养1-2小时；

(5)然后在上述鸡脾淋巴细胞悬液中再加入适量干扰素诱生剂仙台病毒，使其最终浓度为128-1280血凝单位/ml，37℃摇床培养18-24小时；

(6)待干扰素达到高峰值时，离心收集上清，加入盐酸调至pH2.0，4.0℃，放置1-4天，灭活病毒，再加NaOH调至pH 7.0，即得粗制动物干扰素。

本发明的有益效果是：鸡基因工程干扰素具有制备成本高，在临床推广中受到很到限制。本发明利用鸡脾制备动物干扰素的方法：其具有很多优点：生产工艺简单、制备成本低，疗效好。常规用NDV-F诱导鸡脾淋巴细胞产生干扰素含量低。

本发明在仙台病毒诱导干扰素过程中加入黄芪多糖，显著提高利用鸡脾制备动物干扰素的含量，显著降低了药物的成本。本产品注入鸡机体后，具有疗效好、安全可靠、用量低、无毒副作用和成本低等优点。

具体实施方式

以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下：

实施例1

一种动物干扰素的制备方法的具体步骤如下：

(1)鸡脾淋巴细胞制备

无菌采取实验鸡脾脏，用脾脏制备淋巴细胞悬液，加入10μg/ml卡那霉素，用配置好的培养液稀释淋巴细胞悬液，使鸡脾淋巴细胞浓度稀释为每ml含1×106。鸡脾淋巴细胞的分离应在采集后48小时内进行。活细胞数应达到90％以上。并对淋巴细胞单层进行传代培养；使鸡脾淋巴细胞浓度稀释为每ml含1×10⁶。鸡脾淋巴细胞的分离应在制备后48小时内进行。活细胞数应达到90％以上。

(2)诱生病毒

采用仙台病毒，血凝效价达到适宜滴度方可投产。

(3)培养液

采用细胞培养基RPMI-1640，内含5-10％牛血清和10μg/ml卡那霉素或庆大霉素，也可用其它适宜培养液。

(4)生产用原水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。

(5)粗制干扰素的制备工艺

(5.1)诱生病毒的制备