[发明专利]来自棒杆菌属细菌的新的启动子核酸、包含该启动子的表达盒和包含该表达盒的载体、包含该载体的宿主细胞和使用该细胞表达基因的方法

说明书

本申请是于2005年12月16日提出的国际申请 PCT/KR2005/004338(国家申请号：2005800435515，发明名称：来自棒杆 菌属细菌的新的启动子核酸、包含该启动子的表达盒和包含该表达盒的载 体、包含该载体的宿主细胞和使用该细胞表达基因的方法)的分案申请。

技术领域

本发明涉及来自棒杆菌属细菌的新的启动子核酸、包含该启动子的表 达盒、包含该表达盒的载体、包含该载体的宿主细胞和使用该宿主细胞表 达基因的方法。

背景技术

棒杆菌类细菌是用于产生用于许多应用的多种化学物质的微生物，所 述化学物质为如动物饲料、药品，和食品，包括L-赖氨酸、L-苏氨酸，和 多种核酸。通过遗传工程和代谢工程可以开发显示出高生产力的棒杆菌菌 株。为了得到显示出高生产力的棒杆菌菌株，需要在棒杆菌中表达涉及多 种代谢途径的基因。为此，必须开发合适的启动子。

通常，在棒杆菌中，基因在内在地包括在该基因中的启动子的控制下 表达(见例如，Journal of Bacteriology，181(19)，6188-6191，1999)。同时， 在棒杆菌细菌中表达基因的启动子序列的结构是未知的，而其他工业微生 物，如大肠杆菌(E.coli)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的结构是已 知的。因此，已经提出了下面的方法用来产生能够使基因在棒杆菌细菌中 表达的启动子。首先，除去耐受抗生素，如氯霉素的基因的启动子区。使 用合适的限制酶单独地切割从棒杆菌细菌分离的染色体DNA，并将所得 片段导入除去该启动子区的基因中。然后，所得基因用于转化棒杆菌细菌 以产生转化的菌株并测量所转化的菌株的抗生素抗性(见Gene，102，93-98， 1991；Microbiology，142，1297-1309，1996.)。具体地，已经开发了用于 Corynebacterium ammoniagenesis中的非常少数目的启动子， Corynebacterium ammoniagenesis是一种已知的生产核酸的微生物。例如， 在大肠杆菌中使用比tac启动子活性高约10％的启动子(见Biotechnol.Lett. 25，1311-1316，2003.)。然而，当它用于基因的大量表达时，这种启动子显 示出低效率。美国专利号5,593,781公开了一种启动子DNA，其从黄色短 杆菌(Brevibacterium flavum)菌株MJ-233(FERM BP-1497)分离并且具有 比tac启动子更高的活性。然而，这种从短杆菌属分离的启动子DNA在其 他细菌中不能工作。因此，需要开发来自通过商业途径可获得的产氨棒杆 菌(Corynebacterium ammoniagenes)并且在其他细菌中具有高活性的启动 子序列。

因此，本发明的发明人在产氨棒杆菌中寻找强启动子序列并且发现根 据本发明的启动子可以在产氨棒杆菌中以高活性表达基因。

附图描述

图1显示了从产氨棒杆菌细菌提取的样品的二维电泳测定的结果，其 中将测定结果进行银染并显影用于鉴定；

图2图解了根据本发明的实施方案产生p117-gfp的筛选载体的方法；

图3图解了根据本发明的实施方案从筛选载体p117-gfp产生包括启动 子序列pcj1到pcj7的重组载体的方法。

发明详述

技术问题

本发明提供了在棒杆菌中具有高活性的启动子。

本发明还提供了包括所述启动子的表达盒和包括该表达盒的载体。

本发明还提供了包括所述载体的宿主细胞。

本发明还提供了使用所述宿主细胞表达基因的方法。

技术解决方案

本发明提供了包含至少一种选自由SEQ ID NO：1到7组成的组的多核 苷酸的启动子。