[发明专利]GLP-1受体激动剂生物学活性测定方法有效
| 申请号： | 200910265928.1 | 申请日： | 2009-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN101798588A | 公开（公告）日： | 2010-08-11 |
| 发明（设计）人： | 蔡永青;陈霞;梁成罡;李克坚 | 申请（专利权）人： | 上海华谊生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;G01N21/31 |
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| 地址： | 201321 上海市浦东*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | glp 受体 激动剂 生物学 活性 测定 方法 | ||
1.一种GLP-1受体激动剂生物活性检测方法，其步骤包括：
(a)培养合适的检测用靶细胞株；其中，所述的检测用靶细胞株为小 鼠胰岛瘤细胞株Min-6；
(b)制备若干个稀释浓度的GLP-1受体激动剂标准品溶液及供试品 溶液；其中，所述的若干稀释度的GLP-1受体激动剂标准品及供试品溶 液是由25mM至75mM的葡萄糖溶液配置稀释的；
(c)取对数生长期细胞菌株，经过处理过程，加入步骤(b)中制备 的标准品及供试品溶液，并继续培养；
(d)收集上清稀释后，用胰岛素试剂盒检测得到GLP-1受体激动剂 诱导检测细胞分泌胰岛素的效应曲线；
(e)计算GLP-1受体激动剂的活性。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述的GLP-1受体激动剂为 GLP-1,Exendin-4，或它们的类似物。
3.如权利要求1所述的方法，其中，步骤(c)中所述的处理过程包括：
(1)用PBS洗后，加入消化液消化制成细胞悬液，并调整细胞密度， 加细胞悬液于培养板，继续培养；
(2)除去细胞上清，加PBS清洗，加入无糖DMEM培养基，继续培 养；
(3)除去细胞上清，加PBS清洗，加入稀释后的标准品溶液及供试 品溶液，继续培养。
4.如权利要求1所述的方法，其中，步骤(d)中所用的检测波长为 450nm，参比波长为590nm。
5.如权利要求1所述的方法，其中，步骤(e)中计算GLP-1受体激 动剂的方法为四参数回归计算法。
6.如权利要求1所述的方法，其中，所述的葡萄糖溶液葡萄糖浓度 为50mM。
7.如权利要求3所述的方法，其中，所述的细胞密度为5×105个/ml。
8.如权利要求3所述的方法，其中，步骤(2)中的继续培养时间 为1至6小时。
9.如权利要求8所述的方法，其中，所述的继续培养时间为2至4 小时。
10.如权利要求3所述的方法，其中，步骤(3)中的继续培养时间 为4至6小时。
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