[发明专利]一种改良的酚-氯仿法提取真菌DNA

权利要求书

1.一种改良的酚-氯仿法提取真菌DNA，该方法的特征是成本低廉、操作简便、需要样本用量少、得率高，适于酵母样真菌和丝状真菌DNA的提取。

2.权利要求1所述的真菌DNA提取方法的试剂制备方法其特点是：

STE缓冲液：将1.169g NaCl、2.422g Tris、3.632g EDTA溶于200ml去离子水调节PH值至8.0。常温保存备用。

苯酚/氯仿/异戊醇混合液：苯酚/氯仿/异戊醇三种试剂按照25/24/1的体积比例混合常温备用。

氯仿/异戊醇混合液：氯仿/异戊醇两种试剂按照24/1的体积比例混合常温备用。

3.权利要求1所述的真菌DNA提取方法的应用其特点是：

1)、液氮研磨干燥的真菌样本(样本量不少于75mg)，将研磨成粉末状的真菌样本收集到1.5ml EP管中，加入500ml STE缓冲液、30μl蛋白酶K、30μl 10％SDS，于54℃消化6-8h。

2)、加入500μl苯酚/氯仿/异戊醇混合液，振荡至出现絮状物，10000r/min离心4min。

3)、取上清至另一1.5ml EP管中，加入500μl氯仿/异戊醇混合液，振荡混匀后10000r/min离心4min。

4)、取上清至新1.5ml EP管中，加入30μl NaCl溶液(5mol/L)、800μl无水乙醇，混匀后于-20℃放置6-10h，10000r/min离心4min。

5)、保留沉淀加入600μl乙醇(70％)，混匀后10000r/min离心4min。

6)、弃上清后，将沉淀中的乙醇充分挥发干净后加入50μl-100μl的无菌水溶解4℃保存。