[发明专利]一种发酵转化正十七烷生产十七碳二元酸的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及用生物合成技术生产长链二羧酸的方法，具体的说是关于微生物发酵转化正烷烃生产长链α，ω-二羧酸的方法，特别是从正十七烷(nC₁₇)发酵转化高产十七碳二元酸(DC₁₇)的方法。

技术背景：

长链二元酸是指碳链中含有10个以上碳原子的脂肪族二羧酸，是包括C₁₁-C₁₈的一系列二元酸产品，它们有着极其广泛和重要的用途，是化学工业上制造高性能尼龙工程塑料、高级涂料、新兴医药、高档尼龙热熔胶高温介质、生物膜和农药等十几类产业，几十种高档产品的重要原材料。长链二元酸在自然界中不存在，化工方法只能合成十二碳二元酸(DC₁₂)，而且合成条件苛刻，成本高，环境污染严重。因此探索采用生物合成法生产长链二元酸就成为上世纪七十年代以来国内外科研工作者研究的热点课题和化学工业界关注的的焦点。1970年，已故的中科院微生物所副所长方心芳院士，首次开创了石油工业微生物这一新领域，开创了微生物发酵生产长链二元酸的新来源。方院上的接班人陈远童，从1986年以来，领导开展单一长链二元酸系列产品的应用开发研究，二十多年来，已取得7项专利授权证书，4项已形成工业化生产，其中，专利号为ZL89102548.0的发明专利公开的发酵生产DC₁₇，产酸水平达到133g/l，是国内外同类研究成果中产酸水平最高的，但从工业生产角度看，技术还不够成熟，未能实现工业生产。而DC₁₇是化工上生产灵猫香香料的重要原料，自然界中没有，至今国内外都没有经济可行的化工合成方法。本发明在该专利基础上，有了新的发展和提高，可以进行工业化生产。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种新的微生物菌种，以及利用该微生物菌种同步发酵正烷烃生产C₁₀-C₁₈长链α，ω-二元酸的方法，尤其是可以实施工业化生产的同步发酵正十七烷烃，高产α，ω-十七碳二元酸的方法。

本发明所提供的微生物菌株为热带假丝酵母(Candida tropicalis)ly-7，是以一株氧化正烷烃生产混合二羧酸的热带假丝酵母(参见《微生物学报》20(1)：88-93，1980)为出发菌株，经过亚硝酸2次处理和紫外线3次照射，以 一种氧化酶活力筛选指示培养基筛选，经过初筛和3次复筛培养出来，具有对nC₁₇ω-氧化酶活力提高30％，β-氧化酶活力降低25％，能够高产DC₁₇的优良菌株。

具体筛选方法为：将出发菌株经过亚硝酸2次处理和紫外线3次照射，用生理盐水分别稀释为10^-1-10^-3，吸取0.1ml稀释好的菌液，涂布于8巴林糖度的麦芽汁琼脂培养平板上，每个稀释度涂布5个平板，用黑纸包好，置于29℃的培养箱中培养40小时，统计致死率。以原出发菌株为对照，对诱变后的菌株进行发酵生产DC₁₇的试验和产酸量检测，所得优选菌株，即为热带假丝酵母(Candidatropicalis)ly-7。

本发明热带假丝酵母(Candida tropicalis)ly-7已于2009年10月14日在中国典型培养物保藏中心进行保藏，地址为中国武汉武汉大学，保藏号为：CCTCC NO：M 209225。

热带假丝酵母(Candida tropicalis)ly-7的生理特性如下：

糖类的发酵：葡萄糖+，半乳糖+，蔗糖+，麦芽糖+，乳糖-。

同化：葡萄糖+，半乳糖+，山梨糖-，蔗糖+，麦芽糖+，纤维二糖+，海藻糖+，乳糖-，密二糖-，棉子糖-，松三糖+，菊芋糖-，可溶性淀粉+，木糖+，L-阿戊糖+，D-阿戊糖-，核糖-，鼠李糖-，α-甲基葡萄糖苷，甘油+，乙醇+，赤藓醇-，甘露醇+，肌醇-，核糠醇+，半乳糖醇-，葡萄糖醇+，柠檬酸钠-，丁二酸钠+，乳酸钙-。

生长素的需要：生物素++，维生素B₁++，维生素B₂+，维生素B₆+，维生素B₁₂+，叶酸+，烟酸+，泛酸+，肌醇+，对氨基苯甲酸+。

其他：硝酸盐-，冻化牛奶-，熊果酸分解-，凝固牛奶-，油脂酶-。

热带假丝酵母(Candida tropicalis)ly-7形态特征：奶油白色，皱褶型，菌落为蛋糕状和桃酥状。

培养特征：