[发明专利]一种口山酮衍生物的制备方法与应用无效

专利信息
申请号: 200910256560.2 申请日: 2009-12-24
公开(公告)号: CN101921816A 公开(公告)日: 2010-12-22
发明(设计)人: 王长云;邵长伦;魏美燕;林永成;佘志刚 申请(专利权)人: 中国海洋大学
主分类号: C12P17/18 分类号: C12P17/18;A61K31/352;A61P35/00;C12R1/645
代理公司: 青岛海昊知识产权事务所有限公司 37201 代理人: 崔清晨
地址: 266100 山*** 国省代码: 山东;37
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摘要:
搜索关键词: 一种 口山酮 衍生物 制备 方法 应用
【说明书】:

技术领域

发明涉及一种从海洋内生真菌的培养液中提取分离的xanthone衍生物的制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

自从1929年从陆地微生物中制备出青霉素以来,微生物次级代谢产物已成为药物的丰富来源,绝大多数临床应用的抗生素都来源于真菌和细菌。微生物中的活性次级代谢产物还有其他的药用价值,如抗肿瘤,治疗心脑血管疾病,酶抑制剂等。海洋微生物的生活环境与陆生微生物相比迥然不同,特别是高压、高盐度、贫营养、低温、低光照、缺氧等特殊环境因素决定了海洋微生物发展出独特的代谢方式,也提供了陆生微生物无法提供的活性次级代谢产物,海洋微生物被认为是高新颖性化学结构和药物先导化合物重要的潜在资源,人们对从海洋微生物中寻找新的特效药物寄于极大希望。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从海洋内生真菌的培养液中提取分离的xanthone衍生物的制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用,它能满足现有技术的上述需求。

一种xanthone衍生物的制备方法,其特征在于先在菌种培养基中对海洋内生真菌进行菌种培养,再在发酵培养基中进行发酵培养,将发酵产生的液体过滤,除掉菌体,得到的发酵液用有机溶剂萃取;所得萃取液浓缩后,进行柱层析或薄层层析色谱分离,将所得洗脱液浓缩,得淡黄色晶体,即为xanthone衍生物。

上述的xanthone衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明制备的xanthone衍生物对人鼻咽癌KB和人鼻咽癌耐药株KBV200细胞具有强的抑制活性,可用作抗肿瘤药物,并且原料可以进行大规模生产,应用前景广阔。

具体实施方式

制备本发明的化合物时,采取下述各步骤:

(1)先在菌种培养基中对海洋内生真菌进行菌种培养,所用的培养基含有葡萄糖1.0%(重量百分数,下同)、酵母膏0.1%、蛋白胨0.2%、琼脂1.0%、氯化钠0.3%,其余为水。使用时将上述培养基制成试管斜面,上述真菌菌株在30℃下培养5天。

所述的菌种培养基含有葡萄糖0.1%-5.0%、酵母膏0.01%-1%、蛋白胨0.01%-1%、琼脂0.1%-3.0%、氯化钠0.05%-5%,其余为水。培养温度为15-35℃,培养时间为3-10天。

(2)上述培养所得的真菌菌种再在发酵培养基中进行发酵培养,所用的发酵培养基含有葡萄糖1.0%、酵母膏0.1%、蛋白胨0.2%、氯化钠0.3%,其余为水。真菌菌株于28℃培养30天。

所述的发酵培养基含有葡萄糖0.1%-5.0%、酵母膏0.01%-1%、蛋白胨0.01%-1%、氯化钠0.05%-5%,其余为水。培养温度为15-35℃,培养时间为7-40天。

(3)xanthone衍生物5-methoxysterigmatocystin的提取分离

将前一步骤产生的发酵液体过滤,除去菌体,所得发酵液用有机溶剂乙酸乙酯萃取5次,将所得萃取液合并浓缩后,进行柱层析或薄层层析色谱分离,将所得洗脱液浓缩得淡黄色晶体,即为5-methoxysterigmatocystin。

所述的有机溶剂乙酸乙酯可改用正丁醇或氯仿或二氯甲烷。

本实施例制得的5-methoxysterigmatocystin的结构式为:

本发明的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用

本发明制备的化合物的抗肿瘤活性试验

将对数增长期的人鼻咽癌KB和人鼻咽癌耐药株KBV200肿瘤细胞分别制备成靶细胞悬液。取96孔培养板,每孔加入190μL、含有3.0×103个上述靶细胞的悬液,恒温培养24h后,加入10μL含不同浓度测试样品的培养基,对照组加等体积的含10%胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养液。置37℃、5%CO2条件下培养68h,弃上清液,直接于光学显微镜下观察细胞形态。然后按10μL/孔加入3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)液,继续培养4h,弃去上清液。加入二甲基亚砜(DMSO)100μL/孔,吹打,使样品充分溶解,用酶标仪以试验波长为570nm、参比波长为450nm测定光密度OD值。再按

杀伤率=(对照孔OD值-药物孔OD值)/对照孔OD值

计算杀伤率,绘制剂量反应回归曲线,计算半数杀伤浓度IC50

实验表明,本发明的5-methoxysterigmatocystin对人鼻咽癌KB和人鼻咽癌耐药株KBV200细胞具有明显的抑制活性,其IC50值分别为0.027μg/mL和9.08μg/mL,可用作抗肿瘤药物,并且原料可以进行大规模生产,应用前景广阔。

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