[发明专利]抗原检测试剂盒和方法

说明书

与相关申请的交叉引用：

本申请要求了2009年7月30日向韩国知识产权局(Korean IntellectualProperty Office)提交的韩国专利申请号10-2009-0070041的优先权和利益，将其全部内容引入本文作为参考。

发明背景：

(a)技术领域

本发明提供了一种用于检测抗原的试剂盒，包含捕获抗体、结合单链DNA寡核苷酸的检测抗体、互补于该DNA寡核苷酸的单链RNA寡核苷酸以及RNA酶；和用上述试剂盒检测抗原的方法。本发明采用单一分析手段和单一RNA酶，实现了多种生物材料的免疫测定。

(b)背景技术

ELISA(酶联免疫吸附测定)是一种免疫测定，其利用材料与其相应抗体的反应来检测所要分析的特定材料。在ELISA开发之前，进行免疫测定的唯一选择是放射免疫测定，使用放射性标记的抗原或抗体的一种技术。由于放射性造成潜在的健康威胁，所以需要一种替代的免疫测定，其使用非放射性信号来取代放射性信号。响应这种需求，已经开发出ELISA，且其已经成为最常用的免疫测定之一，高灵敏度地检测各种靶物质的存在。

通常，ELISA包括用酶标记的抗体和与该酶反应以产生信号的底物来检测靶物质的步骤。酶促反应导致颜色或荧光中的改变。由于ELISA对每种物质应单独进行，所以当用于分析样品中的超过一种物质时，难于直接对比该样品中共存的各种物质的相对量。

ELISA和其他免疫测定的一个区别在于存在/不存在信号放大过程。大部分免疫测定不包括由酶引起的信号放大过程，且通常基于荧光信号。使用标记于抗体上的荧光团信号的免疫测定可简便地用于进行多重免疫测定，因为每个不同的荧光团在不同的波长的发射，可分别用于多种物质的分析。相比之下，基于酶的免疫测定，例如ELISA，利用由酶促反应导致的吸光度或荧光的改变，需要不同的酶-抗体缀合物来进行多重测定，并需要鉴定和使用多对酶-底物。因此，随着样品中分析物数量的增加，在技术上多重ELISA的完成变得比其他免疫测定更为困难。

最广为人知的没有酶促信号放大的多重免疫测定使用分别能够特异结合相应靶分子的不同种类的抗体，其固定于含有分别对应于靶分子的不同荧光物质的小球体相上。然后测量小球体的荧光信号，小球体中抗体结合至靶分子。但是，这种方法要求使用称为流式细胞仪的昂贵仪器，且因此不如ELISA划算，ELISA在许多实验室都可以方便地进行。近来，一些在单个微量培养板上进行的多重免疫测定被引入。例如在一种方法中，将抗-IgG固定在大约6微米的聚苯乙烯珠上并允许其结合捕获抗体。为进行多重测定，将不同种类分析物的检测抗体与不同的荧光物质一起加入。在另外一种叫做多重-FLISA(荧光联接免疫吸附测定)的方法中，针对多种分析物的抗体连接在不同的QDots上，其分别在不同的波长发射。相同样品中多种分析物的免疫测定可以通过荧光强度的分析同时进行。这些方法的缺陷在于，其检出限与ELISA相比不够灵敏，因为它们没有包含酶介导的信号放大过程。GenTel提供了一种多重免疫测定，其中多种抗体的每一种都直接结合在不同的荧光物质上，并就荧光强度进行测量。

采用酶促反应的基于ELISA的多重免疫测定，包括一种QuansysBiosciences，Inc.提供的方法。在这种方法中，20nl的小点沉积在96孔板的孔底，每个点代表单个靶物质的分析结果。由过氧化物酶-底物反应所增加的发光量通过读取发光图来定量，从而提供了多重-ELISA形式。这种方法有其缺陷，它需要在板上预设点，且需要采集和分析图象的昂贵仪器。另外一种基于ELISA多重免疫测定采用两种分别连接碱性磷酸酶和过氧化物酶的抗体以测量相同样品中两种类型的分析物。酶提供了信号放大作用。尽管原则上这种方法被认为是多重ELISA，但实际上当样品中所要分析的分析物数量增加到大于2时则变得更难进行操作。此外，由于使用不同种类的酶，该方法并不划算。因此，需要开发一种可以更方便进行的新的多重免疫测定。

发明内容：

发明人设计了一种可应用于多重分析的免疫测定，其仅使用一种酶、抗体包被的支持物和常规ELISA中已经使用的吸收或荧光测量仪器。

因此，一个实施方案提供了一种检测抗原的试剂盒，其包括捕获抗体、与单链DNA寡核苷酸缀合的检测抗体、互补于该DNA寡核苷酸并用荧光物质标记的单链RNA寡核苷酸以及RNA酶。

另外一个实施方案提供了一种检测抗原的方法，其使用捕获抗体、与单链DNA寡核苷酸缀合的检测抗体、互补于该DNA寡核苷酸并用荧光物质标记的单链RNA寡核苷酸以及RNA酶。