[发明专利]一种生产病毒疫苗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生产病毒疫苗的方法，特别是涉及利用生物反应器和Disks载体大规模生产病毒疫苗的方法。

背景技术

通常，通过大规模培养动物细胞作为宿主细胞来生产病毒疫苗。目前，用以大规模培养动物细胞的培养体系有两种，生物反应器和微载体，通常结合这两种体系进行宿主细胞培养，较常使用的是搅拌式生物反应器与球形微载体的结合。虽然搅拌式生物反应器与球形微载体结合的培养工艺具有可对培养过程与质量进行监控、生产工艺稳定、易于进行规模的扩大、可减少污染发生、易于控制产品批间质量、提高细胞培养密度的优点，但是，由于这两种体系自身的局限性，这种培养工艺存在着如下缺点：搅拌式反应器易对细胞产生剪切力从而影响细胞吸附效率最终影响细胞得率，反应器罐体的清洗、消毒费时费力，球状微载体利用次数少，耗费生产成本等。

专利文献1(专利号ZL 021120137)虽然提出了利用Disks作为载体进行大规模连续生产病毒疫苗的方法，但是其中使用的生物反应器为固定床篮式搅拌系统的生物反应器，与传统的生物反应器一样，具有剪切力大因而影响细胞得率，反应器罐体清洗、消毒费时费力因而生产成本高，容易批间污染等缺点，并且该专利认为固定床篮式搅拌系统为唯一可使用聚酯切片载体的细胞培养系统。

生物反应器和Disks载体是有别于传统的搅拌式生物反应器和球状微载体的新型细胞培养体系，现还没有将这两种培养体系结合起来用于大规模病毒疫苗生产的报道。

发明内容

鉴于现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于提供一种联合使用生物反应器与Disks载体进行动物细胞大规模培养以生产病毒疫苗的方法，解决现有生物反应器微载体培养体系中存在的对细胞产生的剪切力大的问题，提高细胞得率。另外，还可以解决反应器罐体清洗消毒费时费力，生产效率低，容易产生细胞污染等问题。

为了解决上述技术问题，本发明的发明人等进行了深入研究，从而提供了以下技术方案：

1.一种生产病毒疫苗的方法，其包括以下步骤：

1)将用于生产病毒的细胞接种在装有FibraCel Disks载体的WAVE生物反应器中，进行细胞培养；

2)收获病毒，制成疫苗。

2.根据技术方案1所述的生产病毒疫苗的方法，其特征在于，在培养所述用于生产病毒的细胞的步骤1)之后，进一步包括接种并增殖待生产的病毒的步骤。

3.根据技术方案1或2所述的生产病毒疫苗的方法，其特征在于，细胞培养时的培养体积为50mL～500L，培养体积为生物反应器最大工作体积的20-80％，所述载体的用量为10g/L～40g/L。

4.根据技术方案1或2所述的生产病毒疫苗的方法，其特征在于，培养细胞时，所述生物反应器的摇动角度为3-10°，摇动频率为6-30rpm。

5.根据技术方案1或2所述的生产病毒疫苗的方法，其特征在于，所述病毒疫苗是人用狂犬病疫苗、脊髓灰质炎疫苗、肾综合征出血热疫苗、乙型脑炎疫苗、甲型肝炎疫苗、兽用狂犬病疫苗、小反刍兽疫疫苗、口蹄疫病毒疫苗、猪蓝耳病疫苗、猪瘟疫苗、乙型肝炎疫苗、风疹减毒活疫苗或水痘减毒活疫苗。

6.根据技术方案1或2所述的生产病毒疫苗的方法，其特征在于，所述用于生产病毒的细胞是Vero细胞、Marc145细胞、CHO细胞、PK15细胞、ST细胞、2BS细胞、KMB-17、MRC-5细胞或BHK21细胞。

7.根据技术方案6所述的生产病毒疫苗的方法，其特征在于，所述用于生产病毒的细胞是CHO细胞或Vero细胞。

8.根据技术方案2所述的生产病毒疫苗的方法，其特征在于，所述细胞培养4-8天后，接种病毒。

9.根据技术方案2所述的生产病毒疫苗的方法，其特征在于，病毒增殖阶段的培养温度为32-35℃，pH值为7.2-7.8。

10.根据技术方案1或2所述的生产病毒疫苗的方法，其特征在于，在细胞培养中，起始培养阶段即细胞粘附期的摇动频率和摇动角度大于维持培养阶段即细胞生长阶段的摇动频率和摇动角度。

11.一种细胞培养体系，其用于技术方案1或2所述的方法，该细胞培养体系包括FibraCel Disks载体和WAVE生物反应器。

本发明具有以下的有益效果：