[发明专利]检测结核病治疗效果的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测结核病治疗效果的试剂盒。

背景技术

结核病治疗需要多种抗生素联合使用，用药时间至少为6个月，由于毒副作用大，病人依从性较差，耐药结核病可导致治疗失败。目前结核病治疗效果监测主要依靠抗酸染色或结核菌培养转阴(Holtz TH，Sternberg M，Kammerer S，Laserson KF，Riekstina V，Zarovska E，Skripconoka V，Wells CD，Leimane V.Time to sputum culture conversion in multidrug-resistant tuberculosis：predictors and relationship to treatment outcome.Ann Intern Med 2006；144：650-659)，或X线胸片检查病变的改善。抗酸染色虽然简单易行，特异性也比较高，但敏感性较低，而结核分枝杆菌培养需要4到8周的时间。X线胸片检查缺乏特异性。

发明内容

本发明的目的是提供一种结核病治疗效果监测的试剂盒。

本发明所提供的结核病治疗效果监测试剂盒，它包括如下试剂：

1)荧光标记的抗人CD4抗体；

2)荧光标记的抗人CD154抗体；

3)荧光标记的抗人CD27抗体。

所述试剂盒还包括结核分枝杆菌抗原。结核分枝杆菌抗原可以为BCG(Bacillus Galmette Guérin)(卡介苗)，也可以是结核分枝杆菌蛋白抗原ESAT-6蛋白或结核分枝杆菌蛋白抗原38kD蛋白等。

利用上述试剂盒进行结核病疗效鉴定，与现有的抗酸染色或结核菌培养相比，该检测具有快速简单的优点，只需要从病人采2ml血，2天就可以获得结核病治疗结果，敏感性高。该检测对结核病(特别是耐药结核病)的临床治疗具有指导作用。该方法在国内外尚未见报道。

具体实施方式

下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。

实施例1、结核病特异性免疫分子标识用于结核病治疗效果监测

发明人发现一种新的可用于结核病治疗效果监测的免疫分子标识，用于指导结核病(特别是耐药结核病)的临床治疗。CD27在细胞免疫中发挥了非常重要的作用。在前期研究中，通过对结核病人和正常对照者的对比研究，发现结核抗原特异性CD4T细胞CD27表达减低与结核病治疗失败相关，有希望作为结核病治疗效果监测的免疫分子标识。

根据上述发现，我们设计了结核病治疗效果监测的方法，它包括获得外周血单个核白细胞，标记结核抗原特异性CD4T细胞，检测CD27在结核抗原特异性CD4T细胞上的表达等步骤。

我们制备了结核病治疗效果监测的试剂盒，方便实施上述的方法，该试剂盒为检测CD27在结核抗原特异性CD4T细胞上表达的试剂，即主要包括如下试剂：

1)荧光标记的抗人CD4抗体；

2)荧光标记的抗人CD154抗体；

3)荧光标记的抗人CD27抗体；

4)结核分枝杆菌抗原。

其中，结核分枝杆菌抗原为BCG(Bacillus Galmette Guérin)(卡介苗)。

利用上述结核病治疗效果监测的试剂盒检测了45例肺结核病人治疗效果，其中初治结核病人31例，治疗失败结核病人14例；同时设置正常对照33人。45例肺结核病人通过痰菌涂片抗酸染色或细菌培养、X线胸片、临床表现、对抗痨药物治疗的反应确诊。所有结核病人均采用标准的抗痨方案治疗。14例结核病人在按照标准的抗痨方案治疗后痰菌持续阳性或仍然有结核病变，确诊为治疗失败的结核病人。具体结核病治疗效果监测方法如下所述：

1)从结核病人及对照者抽取2ml外周血，肝素抗凝；

2)用Ficoll-Paque(GE Healthcare，USA)梯度离心法获得外周血单个核白细胞；

3)单个核白细胞悬浮于含10％(体积比)胎牛血清的RPMI 1640培养基(Invitrogen，USA)中，2×10⁶细胞/ml；