[发明专利]一种检测乙肝e抗体的磁性免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，特别是涉及一种检测乙肝e抗体的磁性免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

乙型肝炎由乙型肝炎病毒(HBV)引起，HBV是一种包含部分双链环状DNA基因组的包膜病毒，属于肝DNA病毒科。当病毒在肝细胞中复制时，可以干扰肝脏的功能，随即免疫系统激活产生一系列特异的反应以对抗并根除传染性因素。作为一种病理性损伤的结果，肝脏发生炎症。持续的HBV感染导致的严重的病理学结果包括：慢性肝脏功能不全，肝硬化和肝细胞癌(HCC)。

HBeAb在HBeAg转阴后出现，HBeAb阳性预示患者的传染性已显著或相对降低，病毒复制程度已降低或明显缓解。近年发现个别HBeAb阳性，但乙肝病毒核糖核酸(HBV-DNA)亦为阳性者的病情迁延不愈，提示体内仍有病毒复制。

目前HBeAb的检测方法主要包括酶联免疫试验(ELISA)、化学发光(CLIA)、免疫层析法(胶体金或乳胶颗粒法)，这些方法都有各自的特点和适用对象。

ELISA和CLIA方法是目前临床免疫分析中普遍使用检测技术，但反应时间相对较长，而且都需要酶标仪或发光仪和洗板机以及温箱等复杂设备，无法满足临床急诊术前检测，抢救前指导用药的要求，也限制了在一些基层医疗单位的应用。胶体金或乳胶颗粒为代表的快速检测试纸条，缺点是结果需要肉眼观察，容易受观察者主观判断的影响，且灵敏度较低。

磁性免疫层析(Mgnetic ImmunoChromatographic Test，MICT)是近年来出现的一种单人份快速定量检测技术。它是以超顺磁性颗粒(superPMPs)代替传统的标记物(胶体金，乳胶颗粒等)来进行免疫层析，通过检测测量磁场强度来示踪待测样品的含量。该技术与传统技术相比具有下述优势：a.所用磁性检测仪器采用固相元件，微型化设计自成一体，独立运行，体积小，操作简便；b.灵敏度比各类目测快速诊断法高10-100倍；c.读数快速，可在15秒内测量到多达6个分析位点的数据；d.线形范围可达4个浓度数量级；e.超顺磁性纳米微粒由聚合物包被，不会随时间而衰变。该技术继承了传统免疫层析法(胶体金，乳胶颗粒等)简便快速，单人份操作的优点，又弥补了传统免疫层析技术灵敏度低，只能定性，不能定量的缺点，是当今即时检验(Point of Care Test，POCT)技术发展的先进代表。

目前MICT中常用的标记磁颗粒为超顺磁颗粒(superPMPs)，没有外加磁场的情况下不具有任何磁性，只有在外加磁场作用下才会表现出磁性，商品化超顺磁颗粒都经过表面修饰，大大方便了偶联过程，标记简便，重复性好。

发明内容

本发明的目的即是将磁性免疫层析技术应用在HBeAb免疫分析中。将HBeAb共价偶联于超顺磁颗粒上，再将限量的HBeAg与磁颗粒上的HBeAb反应，然后喷涂于玻璃纤维垫上，同时将另一株乙肝e抗体包被于硝酸纤维素膜上制成检测线作为捕获固相，按照常规免疫层析法的原理进行标本的检测，结合简便易行的磁性检测仪进行检测，可以实现快速灵敏地检测，该技术综合了前述几种方法的优势：既可以单人份检测，也可以批量检测，并且可以即时给出定量结果，测量仪器简单可靠，操作简便，方便实用。

为达到上述的目的，本发明的技术方案如下：将包被膜、含有乙肝e抗原的磁颗粒垫、样品垫、吸水垫、依次相互交错2mm地粘贴在底板上，然后在上层覆盖透明塑料密封膜而制成，其中所述的包被膜上预包被有HBeAb检测线，以及预包被了二抗的质控线。

选用的底板为透明塑料底板，包被膜为35mm宽度的硝酸纤维素膜，选用的吸水垫为纤维素膜，磁颗粒垫为玻璃纤维垫，样品垫为经过样品垫处理液预处理的纤维素膜。所述的样品垫处理液是含有1％-5％酪蛋白(casein)和0.1％-1％的聚乙烯醇(PVP)，以及0.01-0.2％吐温-20(Tween-20)的0.02M，pH7.0-7.6的磷酸盐缓冲溶液(PBS)。

检测乙肝e抗原的磁性免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

A、磁颗粒的制备：选用直径为50-300nm的超顺磁颗粒，使用碳二亚胺(EDC)和琥珀酰亚胺(NHS)共价偶联的方式将HBeAb标记到磁颗粒上；

B、将限量的HBeAg与磁颗粒上的HBeAb反应，反应后应保磁颗粒上同时存在磁颗粒标记的HBeAb、磁颗粒标记HBeAb-HBeAg复合物，将制备好的磁颗粒偶联物同时使用定量喷液装置以25μl/cm-50μl/cm的量喷涂于磁颗粒垫上；