[发明专利]一种重组腺病毒及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种重组腺病毒及其制备方法和应用，特别涉及一种表达混合 系激酶3羧基末端肽段的重组腺病毒及其制备方法和在制备神经保护药物中 的应用。

背景技术

载体是基因转移的重要工具，外源基因要进入细胞、逃避溶酶体的降解、 穿过核膜、逃避核酸内切酶的降解，最终才能被表达，选择理想的载体系统安 全、高效地将目的基因导入靶细胞始终是基因治疗的焦点。目前，应用于基因 治疗研究的基因转移载体主要包括病毒载体和非病毒载体两大类。应用非病毒 载体的优点是不存在野生型病毒的污染，相对安全，缺点是转染效率较低；病 毒载体转染效率高，但其在体内应用可能会出现一些毒副作用。所以应根据靶 组织、防治病种的不同，选择合适的转移载体。腺病毒载体在基因治疗临床应 用上的研究已得到广泛而深入的开展。腺病毒是一种无包膜的DNA病毒，毒 粒直径为60-90nm，由20面体的蛋白质外壳和蛋白质核酸复合核心组成。腺 病毒载体的优点：(1)宿主范围广，可感染除淋巴细胞以外的几乎所有细胞；(2) 感染效率高，可感染增殖期和静止期的细胞；(3)安全性好，不整合到人的染 色体中，无插入致突变性；(4)能同时表达多个基因，可用于联合基因治疗；(5) 在包装细胞中能有效增殖，产生滴度高。腺病毒的这些生物学特性使其作为大 多数非遗传性疾病基因治疗的载体。

退行性脑病(老年痴呆、帕金森病)、脑卒中、癫痫等神经系统疾病不仅 严重影响患者的生活质量，亦给其家庭和社会带来沉重的经济负担。开展脑病 神经保护分子机制的研究，并在此基础上筛选药物作用的靶点、开发脑病治疗 药物具有重要的理论意义和临床价值。

混合系激酶3(Mixed lineage kinase-3；MLK3)是MLK家族的成员^[1]。MLK 家族包括MLKs(1-4)、DLKs和ZAKs亚家族，在结构上该家族成员与丝/苏氨 酸蛋白激酶和酪氨酸蛋白激酶均有同源性，因而被命名为混合系激酶家族，但 实际上该家族成员只有丝/苏氨酸蛋白激酶的活性^[2-3]。MLK家族是丝裂原活化 蛋白激酶(mitogen activated protein kinases；MAPKs)的重要上游激酶之一。 MAPKs广泛存在于各种细胞中，由ERKs(extracellular signal regulated kinases)、JNKs(c-Jun N-terminal kinases)和P38MAPKs亚家族组成。ERKs 在细胞生长和分化中起主要作用，而JNKs和P38MAPKs与多种原因诱发的细 胞凋亡密切相关^[4-5]。在所有的MLK家族成员中，只有MLK3可以同时活化 JNKs和P38MAPKs^[6-7]。MLK3通过磷酸化激活MKK4/7和MKK3/6，进而分 别激活JNKs和P38MAPKs信号通路，最终引起细胞凋亡。MLK3在脑组织中 有较高的表达水平。本实验室及国外实验室的研究表明，MLK3-JNKs和 MLK3-P38MAPKs通路的活化参与了多种神经退行性疾病，如老年痴呆、帕 金森病，并在缺血性脑中风、癫痫等神经系统疾病中有重要作用。