[发明专利]NEDD4L基因多态位点在制备预测双氢克尿噻疗效试剂盒中的用途及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及NEDD4L基因多态位点的一种新用途，具体地说是在制备利尿剂预测双氢克尿噻疗效试剂盒方面的用途，属于医学分子生物学领域。

背景技术

高血压是冠心病、脑中风等众多心血管疾病的最大的独立危险因素。近年来，高血压的患病率逐年上升，在世界范围内，2000年全世界有9.72亿高血压患者，到2025年有可能达到15.6亿。在中国，高血压患病率18.8％，高血压患者约有1.6亿，并以每年350万新病例的速度递增。积极干预血压，通过治疗控制高血压可以有效降低脑中风与心脏病的发病与死亡，这已是非常肯定而且被广泛接受的事实。研究证实收缩压降低10-12mmHg和舒张压降低5-6mmHg可使脑中风发病危险减少40％，冠心病发病危险减少16％，总死亡率减少20％。血压越高，降低血压带来的益处越大。单药治疗在非选择高血压人群的有效率为50％左右，六大类抗高血压药物已被临床试验证实均可作为一线治疗药物。

噻嗪类利尿药无论单用或与其它药物联用，都是一类应用非常广泛且有很好疗效的药物。双氢克尿噻(hydrochlorothiazide，HCTZ)是心血管疾病中应用非常广泛的噻嗪类利尿药，也是治疗原发性高血压的一线用药。近年来国内外大规模随机、双盲临床试验证明，双氢克尿噻不但降低患者血压，而且减少脑卒中、冠心病的发病率和由心血管疾病引起的死亡率。我国现阶段仍然为发展中国家，而目前市场上常用降压药物大多数为每片2-8元，对于工薪阶层和农民过于昂贵，直接导致高血压病患者中80％-90％的低收入患者因负担不起药费而放弃长期治疗，造成高血压控制率低下，而脑中风、冠心病等心脑血管疾病高发。

利尿剂，尤其是噻嗪类利尿剂双氢克尿噻每年仅需人民币11元，是目前市场上最为便宜的降压药物，也是最适合中国国情的降压药。虽然双氢克尿噻降压疗效显著，但也有研究发现，无论是在降低血压，减少临床事件，还是在出现不良反应方面，不同个体之间存在着显著差异。这种差异是由多种因素，如环境因素、年龄、性别、体重和治疗前血压等造成，越来越多的研究发现基因变异可以导致不同的病人对药物有不同的治疗反应，相关通路上的基因变异可解释20％-95％的药物反应个体差异，找出这些差异，不但可以指导安全有效的用药，而且具有极大的经济学价值。

发明内容

本发明的发明目的是提供NEDD4L多态性位点rs4149601的新用途，为用于制备准确预测利尿剂双氢克尿噻疗效试剂盒中的用途。

本发明的再一目的在于提供一种可以准确预测利尿剂双氢克尿噻疗效的检测试剂盒。

本发明的第三目的在于提供用于检测NEDD4L多态性位点rs4149601的特异性引物。

本发明的发明思路为：ENaC-NEDD4L-SGK1通路在机体水钠代谢方面发挥重要作用。ENaC位于终末肾单位的细胞顶膜上，为钠离子重吸收的关键限速位置。NEDD4L的WW域与ENaC的PY域结合，使ENaC泛素化，从细胞膜进入溶酶体被降解。如果NEDD4L发生变异，使其与ENaC的结合受到影响，会导致ENaC不能正常的进入溶酶体被降解，而是在细胞膜上持续表达，从而引起钠离子重吸收增加。C2域是NEDD4L的一个重要结构域，对于NEDD4L向细胞膜处转运有重要作用，因此C2域的有无对ENaC的活性影响很大。

NEDD4L基因外显子1末端的变异，可以引起基因剪切点的改变，导致C2域的结构截短及功能改变。我们认为NEDD4L可对钠离子的重吸收产生影响，但其与利尿剂双氢克尿噻治疗效果之间有无直接影响，带着这个疑问，发明人作了进一步的研究。

发明人以NEDD4L基因为功能候选基因，在河南省信阳市农村社区原发性高血压人群中研究了NEDD4L的基因变异对利尿剂双氢克尿噻疗效的影响。发现一个位于NEDD4L基因外显子1的基因变异rs4149601在高血压病人群中与双氢克尿噻的疗效紧密相关。据此制备了预测试剂盒，并在河南信阳的高血压人群进行检测，发现该试剂盒确能有效预测双氢克尿噻的降压疗效。

本发明采用的具体技术方案为：

NEDD4L基因多态性位点在制备预测双氢克尿噻疗效试剂盒中的用途。

上述用途，其中所述NEDD4L基因多态性位点为SNP rs4149601，所述rs4149601位点为A或G。

用于准确预测双氢克尿噻疗效的检测试剂盒，其中，所述试剂盒由下述试剂组成：成分和含量如下50人份，于-20℃保存；

250μL 2×TaqMIX；