[发明专利]一种低分子灵芝多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种赤灵芝多糖的制备方法，尤其涉及一种低分量子灵芝多糖的制备方法。

背景技术

灵芝是中医药学宝库中的珍品，属担子菌纲，多孔菌科，灵芝属，在我国有两千多年的药用史，国内外的大量研究结果表明，灵芝具有广泛的药理作用，且毒性低。灵芝化学成分复杂，主要有多糖类、核苷类、呋喃类、三萜类、生物碱、氨基酸、及微量元素。其中灵芝多糖是其扶正固本的有效成分，具有抗肿瘤作用。

灵芝大分子多糖成分的免疫调节的左右已有大量的研究报道，并可通过提高机体的免疫功能而达到抗癌作用，是抗癌作用的有效成分。但往往一种职务或真菌中含有多种多糖成分，分子量大小也各不相同，其活性也各不相同，灵芝中也含有不同的分子量段的多糖成分，为提高多糖的效果，须先将无活性或活性不高的成分去除，富集有活性的多糖部分。

目前已报道的具有抗肿瘤作用的灵芝多糖分子量绝大多数为高分子量(分子量为几万到几十万)多糖，对低分子量灵芝多糖的抗肿瘤研究较少。

从灵芝中分类提取水溶性多糖目前普遍采用乙醇分步沉淀法，但得到的多糖杂质多，有效成分含量低，特异性不高。如进一步采用不同浓度的乙醇分步沉淀来纯化，选择性较差，回收率低，得到多糖含量在30％左右，且是多糖的混合物，同时需要使用大量的有机溶剂，提高了成本。

中国专利CN1448409(2003)通过提取制备方法制备得到了分子量为4000-6000的赤灵芝多糖GLP_L。该发明方法中所得的低分子量的赤灵芝多糖分子量在6000以下，主要由GLP_L1和GLP_L2组成，单一赤灵芝多糖GLP_L1和GLP_L2的分子量分别为4100和5700，分子量较小，水溶性好，粘度低，易于制成各种剂型，给药方便。初步的药效结果表明：GLP_L1和GLP_L2是很有的潜力的抗肿瘤药物。该发明方法中，低分子灵芝多糖的制备是水提物通过去除蛋白和透析后得到，但工艺复杂，需要加入氯仿和正丁醇等有机溶剂，不易工业化生产。

因此，为制备分子量为4000-6000的赤灵芝多糖GLP_L，解决现有技术存在的多糖纯度低、特异性不高、成本高、难以工业化化生产的问题，本发明人发现本发明的赤灵芝低分子多糖可以解决上述问题。

发明内容

本发明索要解决的技术问题在提供一种低分子量灵芝多糖的制备方法，以克服现有技术中提取的多糖纯度低、特异性不高、成本高、难以工业化化生产的缺点。

本发明提供一种低分子灵芝多糖的制备方法，包括如下步骤：

1.粉碎：赤灵芝子实体(干品)经粉碎机粉碎成粉末。

2.水提取：称取赤灵芝子实体粉，加15-20倍的水，100℃提取10-20h，离心得提取液，保留，残渣加15-20倍水，100℃提取10-20h，离心得提取液，合并两次提取液.

3.浓缩：提取液浓缩至原体积的1/5±10％。

4.分级丙酮沉：向浓缩液中缓慢加丙酮，边加边搅拌，至含酮量35-40％，室温静置12h～24h，吸取上清液(保留)，下层沉淀液离心得清液，合并上清液，加丙酮，边加边搅拌，至含酮量达到65-70％，10-15℃静置12h～24h，吸取上清液，下层经离心得多糖沉淀。

5.离心干燥：多糖沉淀以丙酮洗涤两次，置真空恒温干燥箱40℃干燥。

本发明在进行沉淀的过程中，发现用常规的甲醇进行醇沉最后得到的灵芝多糖粗品糖含量较低、有效成分偏低、活性偏低，并且溶剂使用量很大，不适于工业化生产。

通过上本发明的制备方法可获得质量稳定、有效成分含量高，且平均分子量被严格控制在4000-6000的灵芝多糖成分，本方法不仅保持了多糖的抗肿瘤活性，而且且多糖提取率高，100g子实体粉可提取得到5.5g以上的多糖粗品，即收率为55％，而按照CN1448409的方法提取得到的多糖粗品收率都在5g以下，即收50％以下；另外灵芝多糖的含量得到了提高，多糖含量超过60％，而按照CN1448409的方法提取得到的多糖粗品含量都在50％以下；同时，本发明中仅用到丙酮作为有机溶剂，而且用量大大减少。所以本制备方法是一种简便、快速、高效、成本低、步骤少、无污染、多糖纯度高的适合工业化生产的方法。

以甲醇作为提取溶剂的工艺研究内容如下：

A.提取工艺条件的选择：