[发明专利]利用鳆发光杆菌检测环境污染物

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物，特别是涉及一株可用于环境污染物检测的海洋发光细菌Photobacteriumleiognathi YL菌株。

背景技术

据本发明人通过查阅资料、文献检索所知，目前已知的海洋发光细菌只有三属，分别是弧菌属(Vibrio)，明亮发光菌属(Photobacterium)，及希瓦氏菌属(Shewanella)，陆地上则有异短杆菌属(Xenorhabdus)。在有氧的自然环境下，发光细菌可产生荧光素酶(LE)，催化黄素单核苷酸(FMNH₂)及长链脂肪醛类发生氧化反应，而发出蓝绿色的荧光。

目前在我国应用较广的是明亮发光杆菌(Photobacterium phosphoreum)，利用明亮发光杆菌进行环境污染物检测的研究有所报道。而除了明亮发光杆菌以外，均没有利用其他种属的发光细菌进行环境污染物检测的报道。本发明中涉及的菌种鳆发光杆菌(Photobacterium leiognathi)与明亮发光杆菌(Photobacteriumphosphoreum)为同属异种，在菌体形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列上二者均有很大差异。但该菌株Photobacterium leiognathi YL表现出稳定的发光性能，对环境污染物敏感，作为环境污染物的指示菌，可以用于环境污染物的检测。

发明内容

本发明的目的是提供一株来源于海洋环境的发光细菌菌株Photobacterium leiognathi YL(鳆发光杆菌YL)以及利用该菌株进行环境污染物的定量检测。

本发明分离纯化出一株来源于海洋环境的发光细菌YL，该菌种为革兰氏阴性菌，杆状(附图1)。结合16S rDNA测序结果构建的系统发育树(附图2)和生理生化结果(表1)，发光细菌YL被鉴定为鳆发光杆菌(Photobacterium leiognathi)。该菌株于2006年12月27日委托中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)保藏，保藏号为M 206139。该菌株的16S rDNA基因序列已经提交GenBank核酸序列数据库，存取号为EF017227。该菌株具有发光特性，能够用来检测环境污染物。

该菌株具有生长快、发光性能稳定、对营养要求低、对环境污染物敏感等特点，荧光扫描确定该发光细菌的发光强度在474nm形成最大峰。多种受试环境污染物的浓度与污染物对该菌株Photobacteriumleiognathi YL发光强度抑制率呈正比，能够实现对受试环境污染物的定量检测。利用本菌株检测环境污染物具有成本低、操作简便、灵敏度高等特点，能够满足多种污染物的快速检测的需要。

附图说明

附图1发光细菌YL扫描电镜照片。

附图2根据细菌16S rDNA序列分析结果构建的系统发育树，括号内为该菌株在GenBank中的收录号，分支上的数字代表置信度。

附图3发光细菌YL的发光光谱图。

附图4Zn²⁺浓度与发光细菌YL发光抑制率的线性关系图。

附图5Cu²⁺浓度与发光细菌YL发光抑制率的线性关系图。

附图6pb²⁺浓度与发光细菌YL发光抑制率的线性关系图。

附图7氯霉素浓度与发光细菌YL发光抑制率的线性关系图。

具体实施方式

实施例1

从青岛近海捕得常见海产品，包括鱿鱼、对虾、黄鱼、黑头鱼、安康鱼等。将各种水产品分割成小块置于固体培养基平板内，在隔水式恒温培养箱25℃恒温培养10h，暗室观察发光情况。标记发光的菌落，进行平板划线培养。经过多次分离纯化，得到发光细菌YL。

实施例2

取发光细菌YL单菌落接种于100ml液体培养基中(培养基组成：蛋白胨5g、酵母膏1g、FePO₄ 0.1g、NaCl 20g、甘油3ml、蒸馏水1000ml)，27℃摇床培养8hr使菌体达到对数生长末期。

取5ml不同浓度的重金属锌溶液加入到5ml菌液中，27℃摇床培养反应20min。反应完毕后，于微弱发光测量仪中测量发光值，测量时间为50s，结果取平均值。从测定结果可知抑制率和Zn²⁺浓度成正比(图4)，因而在进行食品或环境中该种污染物的测定时，可根据抑制率推测出污染物的含量。

实施例3