[发明专利]一种酵母菌的原生质体制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程中微生物育种的方法，特别涉及一种酵母菌的原生质体制备方法。

背景技术

木质素是植物细胞壁主要成分，畜禽消化道内几乎没有降解木质素的酶，食草动物靠消化道寄生的微生物能够部分降解木质素，但单胃动物不具有这种能力。木质素是动物消化植物性饲料的最大障碍，微生物发酵是克服这一难题的最理想方法。选育木质素降解率高，且在饲料上易于发酵的微生物菌株，是养殖业实现″节粮″的关键技术。酵母菌属于兼性厌氧微生物，在有氧和无氧状态下都能生存和繁衍，生长速度快，且菌体营养物质含量高，使用安全，是理想的饲料发酵菌株。酵母菌全身是“宝”，它含有丰富的蛋白质、氨基酸、核酸、维生素、微量元素以及各种消化酶。其细胞壁含有多种生物活性物质，可作为营养物质被吸收，还可以促进免疫反应，具有益生菌和益生元的某些作用。从20世纪40年代开始，酵母菌作为蛋白质补充料广泛应用于畜牧生产。但酵母菌不具有木质素降解功能，为了构建出具有木质素降解力的酵母菌变异菌株，使其具有木质素的降解能力，需对酵母菌的原生质体的制备方法进行研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种酵母菌的原生质体的制备方法，使其原生质体的形成率达到90-96％。

本发明的技术方案是：

一种酵母菌的原生质体的制备方法，其特征在于：在YEPD液体培养基上培养14-18h的酵母菌，用0.1％-0.2％β-巯基乙醇预处理10-20min，用0.6mol/LKCL做渗透压稳定剂时，采用2％蜗牛酶；在28-30℃酶解1-2h；原生质体形成率达到90％-96％。

所述的白腐真菌的原生质体的制备方法，最佳工艺参数是：

在YEPD液体培养基上培养16h的酵母菌，用0.2％β-巯基乙醇预处理20min，用0.6mol/LKCl做渗透压稳定剂时，采用2％蜗牛酶；在30℃酶解1h；原生质体形成率达到90-96％。

本发明效果是：

采用本酵母菌的原生质体制备方法：

1.制备工艺简单，易操作。

2.原生质体的形成率可达90-96％。

具体实施方式

一种酵母菌的原生质体制备方法提供了适合制备高酵母菌的原生质体数量的方法。

实例一：

在YEPD液体培养基上培养14h的酵母菌，用0.1％β-巯基乙醇预处理10min，用0.6mol/LKCl做渗透压稳定剂时，采用2％蜗牛酶，在28℃酶解1h，原生质体形成率达到90-96％。

实例二：

在YEPD液体培养基上培养18h的酵母菌，用0.2％β-巯基乙醇预处理10min，用0.6mol/LKCl做渗透压稳定剂时，采用2％蜗牛酶，在30℃酶解2h，原生质体形成率达到90-96％

实例三：

在YEPD液体培养基上培养16h的酵母菌，用0.2％β-巯基乙醇预处理20min，用0.6mol/LKCl做渗透压稳定剂时，采用2％蜗牛酶，在30℃酶解1h，原生质体形成率达到90-96％

本酵母菌的原生质体制备方法，操作简单，形成率高，可达90-96％。