[发明专利]一种工程蝇凝集素的高效纯化方法无效
| 申请号： | 200910228160.0 | 申请日： | 2009-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN101709075A | 公开（公告）日： | 2010-05-19 |
| 发明（设计）人： | 曹小红;周明慧;王爱华 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C07K1/16 | 分类号： | C07K1/16;C07K14/435 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 王来佳 |
| 地址： | 300457 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 工程 凝集素 高效 纯化 方法 | ||
1.一种工程蝇凝集素的高效纯化方法，其特征在于：其纯化的步骤是：
(1)对工程蝇的幼虫进行诱导，待幼虫化蛹后，收集蛹，除去饲养过程中混入的杂质，清水漂洗，收集漂洗干净的蛹，加提取溶剂研磨，3-5℃静置0.8-1.2h，得到浸提液备用；
(2)由步骤(1)得到的浸提液，离心，过滤除去杂质，重复离心、过滤2-4次，收集过滤后的上清液；
(3)将步骤(2)得到的浓缩液混胶，在4-40℃条件下与胶混合，每30min缓慢搅拌一次，3.5-4.5h后装柱，缓冲液平衡，缓冲液洗脱流速控制在0.8-1.2mL/min，洗脱杂蛋白，之后进行糖溶液竞争性洗脱，竞争性洗脱液流速控制在0.5mL/min，收集洗脱峰；
(4)将收集到洗脱峰过Sephadex G200凝胶柱，先后检测到四个峰值，分别对各个峰的成分进行回收、冷冻、干燥，得到白色粉末即为凝集素。
2.根据权利要求1所述的一种工程蝇凝集素的高效纯化方法，其特征在于：所述步骤(1)中幼虫化蛹的化蛹率为80％。
3.根据权利要求1所述的一种工程蝇凝集素的高效纯化方法，其特征在于：所述步骤(1)的提取溶剂为生理盐水或者昆虫缓冲液BIS。
4.根据权利要求1所述的一种工程蝇凝集素的高效纯化方法，其特征在于：所述步骤(3)中混胶使用的是Sepharose 4B。
5.根据权利要求1所述的一种工程蝇凝集素的高效纯化方法，其特征在于：所述步骤(4)的缓冲液为昆虫缓冲液BIS。
6.根据权利要求1所述的一种工程蝇凝集素的高效纯化方法，其特征在于：所述步骤(4)的竞争性洗脱液为D-半乳糖溶液0.2-0.3moL/L。
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