[发明专利]一种从“太岁”中提取基因组的方法

说明书

技术领域

本发明属于分子微生物学领域，具体地涉及一种从“太岁”中提取基因组的方法。

背景技术

“太岁”是一种存在于地球上的不明生物体，它的存在、作用和影响在生物学界始终有争议。“太岁”生活于土壤中，生命力极强，它不是动物，也不是植物。它既有原生生物的特点，也有真菌的特点，是活的生物体，世界罕见。“太岁”是迄今发现的最古老的古生物活体标本，可能生命进化过程中介于原生动物和真菌之间的原生质生物，处于生命演化的一个岔道口上。

李时珍在《本草纲目》中称之为“肉芝”，并称其为“本经上品”。古籍《山海经》称“太岁”为“视肉、聚肉、肉芝”，描述它“食之尽，寻复更生”。它外表好像动物的皮，切开后发现里面却是像肥肉的粘质体。由于非常少见，一直是生物演化研究的一个盲点，所以它对研究生命演化过程十分有意义。关于“太岁”是何种生物体的猜测，各种概念都是是非常模糊的，还不能清楚解释“太岁”为何种物种，惟有通过分子系统分析等研究，才能将“太岁”身上的秘密一一揭开。

然而，目前采用常规的提取技术，从“太岁”中无法提取出基因组，给“太岁”的进一步研究带来困难。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种从“太岁”中提取基因组的方法。

应用本发明，一方面获得了“太岁”中的基因组，另一方面为“太岁”的分子生物学研究打下了基础。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：一种从“太岁”中提取基因组的方法，包括，a)将“太岁”组织经裂解液研磨后，得研成碎末的“太岁”组织液；b)向研成碎末的“太岁”组织液中加入氯仿-异戊醇，摇匀，离心，取上清液；c)在约72℃水浴中停留约3min，置于冰浴中，取出自然升温至室温；d)加入2～7mol/L的除蛋白溶剂，使除蛋白溶剂终浓度为约1mol/L；e)重复b)至d)步骤，直至加入氯仿-异戊醇，离心后，两层界面看不到蛋白物质，取上清液；f)加入经-20℃预冷的95％乙醇，混匀，有絮状沉淀析出，离心收集沉淀。

从“太岁”中提取基因组的方法，还包括在步骤a)之前，将“太岁”组织经消毒处理。

所述“太岁”组织是在“太岁”表皮下割取，经消毒、削去表皮组织后切成小块，制得“太岁”无菌组织，然后加入裂解液研磨成碎末。

制取“太岁”的无菌组织.无菌的意义是除去“太岁”中所带有的杂菌，同时不再混入“太岁”组织以外的杂菌，这样获得的基因组才是纯粹的“太岁”的基因组；否则，如果不能保证用于提取基因组的“太岁”组织不是无菌组织，所提取的基因组即使通过氯仿-异戊醇抽提，也不能确保该基因组就是来自该“太岁”原本的基因组.

无菌组织是从未接触外界有菌环境的组织，通过从大块“太岁”上索取部分组织块，再对其进行消毒处理得到无菌组织块。

所述的裂解液由裂解液I、裂解液II、裂解液III和水，按体积比为8～12∶8～12∶1∶8～10混合；

所述的裂解液I是：氯化钠1.5mol/L、柠檬酸三钠0.15mol/L，pH＝7.0；

所述的裂解液II是：0.1mol/L EDTA；

所述的裂解液III是：1％SDS。

所述的氯仿-异戊醇中，按体积比，氯仿和异戊醇的比为20～26∶1。优选24∶1。

所述的除蛋白溶剂是NaCl或蛋白酶。优选NaCl。

本发明的有益效果是：通过本发明，获得了“太岁”的基因组，经琼脂糖凝胶电泳检测，检测到了电泳条带，说明通过本发明确实获得了“太岁”的基因组，开创了“太岁”的分子生物学研究先河。使通过分子生物学方法鉴定“太岁”的物种属性成为了可能。

本发明的意义在于突破了单纯微生物学研究“太岁”物种属性的局限性，成功从“太岁”组织块中提取并获得其基因组，是从分子生物学角度揭开千年“太岁”之谜的首创之举；通过获得其基因组而证实了“太岁”是有生命的生物学观点；以后可对所提取的基因组的PCR反应产物进行测序来构建进化树，确定“太岁”在生物界的分类地位。

附图说明

图1是采用本发明的方法提取出的“太岁”基因组的琼脂糖凝胶电泳检测图。

图中1、2、3和4是“太岁”基因组，5是Marker。

具体实施方式

以下结合具体实施方式对本发明做进一步详细描述

实施例1

1.无菌“太岁”组织制备：

(1)取样：在“太岁”表皮组织下割下大约2立方厘米的组织块。