[发明专利]磁酶免化学发光检测梅毒螺旋体抗体的方法

权利要求书

1.磁酶免化学发光检测梅毒螺旋体抗体的方法，该方法包括以下步骤：

(1)包被：以金磁微粒作为反应和分离的固相载体，将梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原偶联在金磁微粒的表面；

(2)封闭：用封闭液封闭金磁微粒表面未与抗原结合的空白位点；磁性分离，弃上清，用清洗缓冲液清洗后悬于保存缓冲液中保存备用；

(3)与待测物结合：将待检标本、酶标抗原结合物加入经过步骤(2)封闭后的结合有抗原的金磁微粒中反应，使包被在金磁微粒表面的抗原与待检标本中的梅毒螺旋体抗体和酶标抗原结合物结合，形成特异性抗原-抗体-酶标抗原复合物；

(4)清洗：用清洗缓冲液清洗，磁性分离，弃上清；

(5)检测：向经过步骤(4)处理后形成的抗原-抗体-抗原复合物的金磁微粒中加入化学发光底物液，在化学发光底物液加入后的3～50分钟内测量各孔的发光强度。

2.根据权利要求1所述的磁酶免化学发光检测梅毒螺旋体抗体的方法，其特征在于：

所述步骤(1)将梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原偶联在金磁微粒表面的方法包括：

(1.1)预处理：取金磁微粒，用偶联缓冲液清洗1～3遍；

(1.2)偶联：将梅毒螺旋体特异性重组蛋白抗原与偶联缓冲液混合，将所得混合液加入经过预处理的金磁微粒中，置于摇床，在4～37℃，100～300rpm条件下充分反应，反应完后，置于磁性分离器上，磁性分离，弃上清；

(1.3)清洗：用清洗缓冲液清洗2～5次，磁性分离，弃上清；

所述步骤(2)封闭的方法是：在步骤(1)的产物中加入封闭液，置于摇床中，在4～37℃条件下，以100～300rpm的转速反应1～2小时，封闭金磁微粒表面未与抗原结合的空白位点；

所述步骤(3)反应的条件为：将待检标本、酶标抗原结合物加入金磁微粒中，置于摇床，在4～37℃条件下，以100～300rpm的转速反应0.5～1小时；

3.根据权利要求2所述的磁酶免化学发光检测梅毒螺旋体抗体的方法，其特征在于：

步骤(1)偶联缓冲液是pH＝3.6～5.6，浓度为0.005M～1M的醋酸盐缓冲液、pH＝5.0～8.0，浓度为0.5×～10×的磷酸盐(PBS)缓冲液、pH＝7.0～9.0，浓度为0.005M～1M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液、pH＝9.0～11，浓度为0.005M～1M的碳酸盐(CBS)缓冲液、pH＝3.0～7.0，浓度为0.005M～1M的柠檬酸盐缓冲液之中的任一种。

步骤(1.3)清洗缓冲液是浓度为0.005M～1M的Tris-HCl缓冲液或摩尔浓度为0.5×～10×的PBS缓冲液。