[发明专利]从云南山枇花中提取的活性成分及其应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种从云南山枇花植物中提取的活性成分及其应用，属生物医药技术领域。

背景技术：

淡紫拟青霉[Paecilomyces lilacinus(Thom.)Samson]属半知菌纲丝孢菌目、丝孢菌科真菌。它广泛腐生于土壤、植物根际等，是一类典型的土壤腐生真菌。研究表明，部分拟青霉属(Paecilomyces)的真菌是人体的病原菌，而淡紫拟青霉(P.lilacinus)能引起人的全窦炎。这种由广泛存在的真菌引起的人的疾病受到关注。抗生素主要来源于植物和微生物，其中许多已广泛用于治疗各种微生物感染性疾病，由于病原菌不断产生的耐药性，原有的医用抗菌素在减退，因此迫切需要不断开发新的抗生素。

云南山枇花(Gordonia chrysandra)为山茶科(Theaceae)植物，生长于海拔1100-2400米的阔叶林下或常绿灌丛中，在云南大部分地区及缅甸有分布。文献检索未见有关云南山枇花具有抗淡紫拟青霉活性的公开报道。

发明内容：

本发明的目的是从植物产生的代谢产物中，筛选出对人体病原真菌淡紫拟青霉(P.lilacinus)具有强抑制作用的活性成分，作为制备医用抗生素的应用。

本发明是这样实现的：

1、活性成分的制备

本发明所用的植物是云南山枇花(G.chrysandra)，采自中国科学院昆明植物研究所植物园内。

本发明的活性成分经如下步骤得到：

a.将云南山枇花的枝或叶用水洗干净后，在烘箱中50℃温度下烘干；

b.将烘干后的枝或叶切碎，放入三角瓶内，用甲醇浸泡，第一次浸泡提取的时间为4小时，第二次和第三次的时间分别为24和48小时；

c.将三次浸提的提取液合并后，浓缩至溶剂蒸发后得浸膏；

d.将浸膏用甲醇溶解，制备成浓度为5mg/ml的活性成分。

2、制备试验用的病原真菌

淡紫拟青霉(P.lilacinus)：将淡紫拟青霉接种于马铃薯培养基(马铃薯：200克，蔗糖：20克，琼脂18克，自来水1000ml，pH自然)上，于28℃下培养10天。用无菌蒸馏水将孢子洗下后，加入到PDA培养基中，调整孢子浓度为10⁴，将含有淡紫拟青霉孢子的PDA培养基倒入9cm的平板中，待培养基凝固后，冻于4℃冰箱中备用。

3、试验方法

纸片扩散法：在无菌操作台上用微量注射器将样品注入纸片(做两个剂量，0.5mg/disc，0.1mg/disc)，用电吹风将纸片吹干待溶剂挥发后，置于含有淡紫拟青霉孢子的PDA平板上，28℃下培养48小时后，观察抑菌结果，测量抑菌圈的大小(含纸片的直径0.6cm)。同时在纸片上加入提取过程中使用过的溶剂甲醇作为对照，同时还做空白纸片对照。整个实验重复3次。

本发明的从云南山枇花植物中提取的活性成分，对人体病原真菌淡紫拟青霉(P.lilacinus)有强抑制作用，可作为制备医用抗生素应用。

本发明的从云南山枇花植物的枝和叶中提取的活性成分，具有成本低，制备方法简便，对人体病原真菌淡紫拟青霉(P.lilacinus)有强抑制作用的优点，能用于医用抗生素的制备。

具体实施方式：

实施例一：

云南山枇花的叶用水洗干净后，在烘箱中50℃烘干。将烘干后的叶切碎，放入三角瓶内，用甲醇浸泡，第一次浸泡提取的时间为4小时，第二次和第三次的时间分别为24和48小时。将三次浸提的提取液合并后浓缩至溶剂蒸发得浸膏。该浸膏用甲醇溶解，制备成浓度为5mg/ml，用于做活性测定。同时做对照，结果见表1。

表1云南山枇花的叶提取物对淡紫拟青霉(P.lilacinus)的抑菌作用