[发明专利]一种固定含氨基化合物的活性载体及其固定方法

说明书

技术领域

本发明属于含氨基化合物在固相材料表面的固定技术领域，特别是氨基酸或蛋白质在固相材料表面的固定，尤其是将抗原或抗体固定在固相载体，通过特异性免疫反应，进行痕量检测的免疫分析领域。

背景技术

免疫分析诊断技术具有灵敏度高，特异性强，标记物稳定等特点外，其检测程序亦简便、快速，只需微量标本，近年来已应用于检测各种激素，肿瘤标志物，药物及其它微量生物活性物质，亦可用于细菌和病毒感染的快速诊断。

在目前应用的免疫分析诊断技术中，载体是以聚苯乙烯为主要原料制成的实心珠、管状物、96孔板等，检测的抗体或者抗原通过物理吸附的方式附着在载体表面，在吸附过程中，抗体或者抗原需要比较高的浓度(一般为10μg/mL)，而这种方式的缺点是：

1.浪费了宝贵的抗体或者抗原，尤其是有的抗体或者抗原价格很贵，造成诊断成本的提高。(因为真正吸附在载体表面的抗体或者抗原只有10％左右)。

2.由于抗体或者抗原是吸附在载体表面，随着时间的推移，抗体或者抗原会从载体的表面脱落，因而影响检测结果的可靠性。

3.由于抗体或者抗原是吸附在载体表面，使得同批次的均一性差。

发明内容

为解决上述现有技术中出现的问题，本发明提供一种固定含氨基化合物的活性载体及其固定方法。该活性载体带有磺酰氯基团，能够与氨基在温和的条件下反应，特别是与含有氨基的具有生物活性的物质如氨基酸、蛋白质、抗原、单克隆抗体、第二抗体、多克隆抗体以及核苷酸等反应。

本发明提供的一种固定含氨基化合物的活性载体及其固定方法可用于放射免疫分析、酶免疫分析、化学发光免疫分析、时间分辨免疫分析、聚合酶链反应、基因工程或多肽的固相合成。其具体技术方案是：以具有芳香环的高分子聚合物为固相材料，通过化学方法，即一步法或两步法反应得到带有功能性基团磺酰氯的活性载体，然后通过磺酰氯基团与含有氨基的目标化合物在碱性水溶液中反应，使含有氨基的目标化合物以化学键的形式固定在固相材料表面上。

所述的固相材料为用聚苯乙烯制成的实心珠、管状物或者96孔板。

一步法的具体步骤为：

A.以400-800体积份的甲苯为溶剂，80-250体积份的氯磺酸为磺化剂，20-250重量份的三氯氧磷或者氯化锌为催化剂，将上述试剂混合均匀；

B.10-60℃条件下，将固相材料浸泡于步骤A配制的混合液中4.0-12.0小时，用水冲洗固体表面，再用丙酮洗涤，干燥即可；

重量份与体积份的关系为g/ml或kg/l。

两步法的具体步骤为：以400-800体积份的甲苯为溶剂，与80-250体积份的浓硫酸混合均匀后，10-60℃条件下，将固相材料浸泡在甲苯与浓硫酸的混合液中反应4.0-12.0小时；向混合液中再加入20-250重量份的氯化亚砜或者三氯化铝继续反应4.0-12.0小时；用水冲洗固体表面，再用丙酮洗涤，干燥即可；所述重量份与体积份的关系为g/ml或kg/l。

一步法优选条件一：

A.以640体积份的甲苯为溶剂，210体积份的氯磺酸为磺化剂，80重量份的三氯氧磷或者氯化锌为催化剂，将上述试剂混合均匀；

B.60℃条件下，将固相材料浸泡于步骤A配制的混合液中6小时，用水冲洗固体表面，再用丙酮洗涤，干燥即可；

一步法优选条件二：

A.以780体积份的甲苯为溶剂，160体积份的氯磺酸为磺化剂，220重量份的三氯氧磷或者氯化锌为催化剂，将上述试剂混合均匀；

B.30℃条件下，将固相材料浸泡于步骤A配制的混合液中10.5小时，用水冲洗固体表面，再用丙酮洗涤，干燥即可；

两步法优选条件一：以420体积份的甲苯为溶剂，与230体积份的浓硫酸混合均匀后，30℃条件下，将固相材料浸泡在甲苯与浓硫酸的混合液中反应4.5小时；向混合液中再加入180重量份的氯化亚砜或者三氯化铝继续反应10小时；用水冲洗固体表面，再用丙酮洗涤，干燥即可；

两步法优选条件二：

以720体积份的甲苯为溶剂，与90体积份的浓硫酸混合均匀后，20℃条件下，将固相材料浸泡在甲苯与浓硫酸的混合液中反应11小时；向混合液中再加入80重量份的氯化亚砜或者三氯化铝继续反应5小时；用水冲洗固体表面，再用丙酮洗涤，干燥即可；

重量份与体积份的关系为g/ml或kg/l。