[发明专利]Roundup Ready转基因大豆EPSPS基因检测用引物组、快速诊断试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种Roundup Ready转基因大豆EPSPS基因检测用引物组，其特征在于该引物组由外引物F3、外引物B3、内引物FIP和内引物BIP组成，其中：

外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；

内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；

或者，

外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；

外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；

内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示；

内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示。

2.一种Roundup Ready转基因大豆EPSPS基因快速诊断试剂盒，其特征在于该试剂盒由权利要求1所述引物组、Bst DNA聚合酶、反应液、稳定液、显色液和阳性对照液组成，以上六种液体分别置于容器中，其中，所述反应液的配方为：每1L反应液中含有1.6～2mmol dNTP、20～25mmol Tris-HCl、10～12.5mmol氯化钾、10～12.5mmol硫酸铵、8～10mmol硫酸镁、1～1.25mlTritonX-100、0.8～1mol甜菜碱、内引物FIP/BIP各1.6～2mol和外引物F3/B3各0.2～0.25mol；所述阳性对照为EPSPS基因DNA片段。

3.根据权利要求2所述快速诊断试剂盒，其特征在于所述的显色液为SYBR Green I或EvaGreen。

4.根据权利要求2所述快速诊断试剂盒，其特征在于所述每1L反应液中含有2mmol dNTP、25mmol Tris-HCl、12.5mmol氯化钾、12.5mmol硫酸铵、10mmol硫酸镁、1.25ml TritonX-100、1mol甜菜碱、内引物FIP/BIP各2mol和外引物F3/B3各0.25mol。

5.根据权利要求2所述快速诊断试剂盒，其特征在于所述稳定液为石蜡油。

6.一种利用权利要求2所述快速诊断试剂盒检测Roundup Ready转基因大豆EPSPS基因的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

(1)待测样品DNA的制备；

(2)在反应管中加入反应液38～40体积％，Bst DNA聚合酶0.9～1.8体积％，稳定液52～54.5体积％，样品模板DNA 4.5～9体积％，恒温反应；

(3)在上述反应管和阳性对照组中分别加入显色液，混匀，样品组显色与对照组相同则为阳性，否则为阴性。

7.根据权利要求6所述检测方法，其特征在于步骤(2)中，恒温反应的反应条件为温度63～65℃，反应时间45～90min。