[发明专利]一种B淋巴细胞系及其用途无效
申请号: | 200910205593.4 | 申请日: | 2009-10-30 |
公开(公告)号: | CN101698831A | 公开(公告)日: | 2010-04-28 |
发明(设计)人: | 朱平;刘辉 | 申请(专利权)人: | 朱平;刘辉 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12N15/869;C12Q1/02;C12R1/91 |
代理公司: | 北京正理专利代理有限公司 11257 | 代理人: | 王德桢 |
地址: | 100034 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 淋巴 细胞系 及其 用途 | ||
技术领域
本发明涉及一种B淋巴细胞系及其用途,具体涉及一种表达HLA-A*0201(Human Lecucyte Antigen即人类白细胞抗原A*0201位点)和IgHV3(Human immunoglobulin heavy chain variable region即人免疫球蛋白重链可变区)家族基因的B淋巴细胞系及其 在疫苗研制和药物筛选中的应用。
背景技术
B细胞淋巴瘤是血液系统常见的肿瘤之一,包括一大类临床特征、愈后迥异的疾 病。免疫治疗一直是人们期望治愈淋巴瘤的方法之一。由于同一个B细胞来源的肿瘤 细胞其表面免疫球蛋白具有相同的可变区(IgHV)结构,构成独特型(Id)。通过杂 交瘤技术可以为患者制备特异的个体化独特型蛋白疫苗成为B细胞淋巴瘤免疫治疗 的主要靶位。但是由于个体化制备,从而限制了这一疫苗技术的普遍应用。我们前期 研究显示来自于免疫球蛋白框架区(FR)的抗原表位可以诱发特异的抗淋巴瘤反应, 由于FR区相对恒定,为制备通用型的B细胞淋巴瘤疫苗的大规模应用提供了可能。
Franc根据IgHV框架区序列的同源性,将IgHV框架区分成7个家族。分别是 V1~V7家族。其中IgHV框架区7家族中又以IgHV3家族多见。我们预测了7个家 族中一些HLA-A*0201限定性CTL(cytotoxic T lymphocyte即细胞毒T淋巴细胞)表 位,并且在我们前期的研究中证实,其中的一些CTL表位确实能够激发抗淋巴瘤的 免疫反应。因此,基于B细胞表面免疫球蛋白框架区的进一步研究有可能成为未来淋 巴瘤免疫治疗的新方向。目前,国内外构建的B淋巴细胞系多来自肿瘤病人体内的肿 瘤细胞的细胞系,其B细胞的重链免疫球蛋白框架区在V3家族的细胞系很少,已知 B淋巴瘤病人群体中,免疫球蛋白重链框架区V3家族(IgHV3)B淋巴瘤细胞最为多 见。而在以B淋巴瘤细胞本身重链框架区家族序列这一标签设计治疗靶点的新药开发 以及疫苗研制的研究中,需要考虑到其在人体内被摄取的抗原呈递细胞的HLA表型 与相应的免疫球蛋白重链框架区V3家族细胞系是否匹配这一问题,而人群中 HLA-A*0201表型所占比例约达30%左右,目前,国内外构建的B淋巴瘤细胞系中表 达IgHV3家族基因的细胞系很少见,其中再表达HLA-A*0201的细胞系还未见报道。
发明内容
本发明所要解决的一个技术问题是提供一种表达HLA-A*0201(Human Lecucyte Antigen即人类白细胞抗原A*0201位点)和免疫球蛋白IgHV3(Human immunoglobulin heavy chain variable region即人免疫球蛋白重链可变区)家族基因的B淋巴细胞系 (ZP-1)。本发明进一步要解决的技术问题是提供该B淋巴细胞系(ZP-1)的用途。
本发明提供一种表达人HLA-A*0201和免疫球蛋白IgHV3家族基因的B淋巴细胞 系(ZP-1),该B淋巴细胞系(ZP-1)已于2009年9月25日保藏在中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心(其简称为CGMCC),其保藏编号为CGMCC No.3293。 保藏地址为北京市朝阳区大屯路,中国科学院微生物研究所,邮政编码100101。
本发明通过下述方法制备得到了B淋巴细胞系ZP-1:
1)将EBV(Epstein-Barr病毒)转染HLA-A*0201表达的正常女性外周血淋巴细 胞,得到稳定转染的永生化的淋巴细胞群;
2)将步骤1得到的细胞群按照有限稀释方法在96孔板中分离,显微镜下观察得到 单个细胞,每孔0.2ml1640全培养基单克隆培养;
3)将步骤2中在96孔板中生长状态良好,铺满至少60%板底的细胞挑出转移至 24孔板中继续培养;
4)将24孔板中得到的细胞重复步骤2)、3)两次;
5)通过检测表达免疫球蛋白IgHV3家族基因及表达HLA-A*0201,获得该表达 HLA-A*0201和免疫球蛋白IgHV3家族基因的B淋巴细胞系。
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