[发明专利]金针菇多孢自交育种方法

说明书

技术领域：

本发明属于食用菌育种领域，具体的说涉及一种用多孢自交育种方法选育金针菇菌种的过程。

背景技术：

金针菇是我国工厂化生产发展最快的食用菌种类。几十年来，为了跟上产业发展的要求，国内同行一直致力于金针菇新品种的选育。其中应用最频繁的就是直接将两个亲本杂交配对的育种方法。然而，此种方法的缺点在于，对于亲本的选择具有局限性，即表现出目的性状的亲本其自身携带的基因多为杂合基因，或带有隐性有害基因，造成目的性状遗传不稳定，大大降低育种品质和育种效率。所以，我们亟需开辟食用菌遗传育种研究的新方法。

在作物育种上经常利用自交的方法得到优质品种。据资料显示，在玉米、甘蔗等植物的自交后代中，会表现出亲本所没有的优良性状，即若干性状出现超亲现象。自交育种在遗传与育种中有以下重要作用：1.杂合基因分离、纯化；2.淘汰有害隐性基因，改良遗传组成；3.稳定遗传性状。然而，目前还未见将自交的方法应用到金针菇等食用菌的选育研究，并且，未见运用多孢自交的方法成功选育出金针菇优秀新菌种的研究和报道。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于提供一种金针菇多孢自交育种方法，应用于金针菇工厂化栽培优秀新菌种的选育中。

本发明的金针菇多孢自交育种方法，包括以下步骤：

(1)孢子收集：收集不同亲本菌株的子实体单孢子；

(2)多孢自交群体的建立：分别将各个亲本的单孢子混合，在培养基上进行多孢自交；

(3)多孢自交菌种进行栽培，筛选性状优良的菌株；

(4)单孢分离：收集优良自交菌株的子实体单孢子，培养获得单核菌丝；

(5)杂交群体的建立：单核菌丝杂交配对，获得杂交菌种；

(6)杂交菌种进行栽培，筛选性状优良的菌株，即为新菌种。

具体方法步骤为：

(1)孢子收集：收集不同菌株的子实体单孢子

分别取不同亲本菌株发育完全的金针菇鲜子实体，于无菌环境下剪去菌柄，将有菌褶一面平贴在平皿上，过夜，收集孢子印。

(2)多孢自交群体的建立：分别将亲本的单孢子混合，在培养基上进行多孢自交；

上述孢子液涂布于PDA平板中，23℃下黑暗中倒置培养5~10d，在平板上肉眼可见大片密集菌落后，用接种针挑小菌丝块转接于PDA平板上，继续培养3~5d。在菌落外缘挑小菌丝块压水玻片于显微镜下(放大400倍)观察菌丝有无锁状联合，菌丝有锁状联合的为所需双核体，即多孢自交后代。在4℃条件下保存备用。

(3)多孢自交菌种进行栽培，筛选性状优良的菌株；

工厂化条件下进行栽培。测量日均生长速度，观察生长势。子实体成熟时采收，并拍照。记录子实体单瓶产量、颜色、菌柄长度、直径、菌盖直径及出菇期、栽培周期等数据。

按照性状筛选优良菌株。筛选标准为：菇体白色，单瓶产量高(大于180g)，栽培期短(小于45d)，菇形整齐、美观(菌盖直径1~2.5cm，菌柄长度大于13cm，菌柄直径1~3cm。)

(4)单孢分离：收集优良自交菌株的子实体单孢子，培养获得单核菌丝；

孢子收集方法同上。将50μL孢子液涂布于PDA平板中后，23℃下黑暗中倒置培养3~5d，在平板上肉眼可见微小菌落后，用接种针挑单个菌落转接于PDA平板上，继续培养3~5d(条件同上)。在菌落外缘挑小菌丝块压水玻片于显微镜下(放大400倍)观察菌丝有无锁状联合，菌丝无锁状联合的为所需单核菌丝。在4℃条件下保存备用。

(5)杂交群体的建立：单核菌丝杂交配对，获得杂交菌种；

每个菌株随机挑选30个单核体，按预定组合进行单核体间的相互配对，配对的2个单核体间距1cm接种在PDA平板上，23℃黑暗培养3~5d，用接种针在交界菌落边缘挑小菌丝块(约0.5×0.5cm2)转接于PDA平板上，培养3~5d，重复挑取转接培养1~2次。在菌落外缘挑取菌丝，观察有无锁状联合，有锁状联合的为配对成功的双核体，即杂交菌种。

(6)杂交菌种进行栽培，筛选性状优良的菌株，即为新菌种。

运用本发明的方法选育出的金针菇菌种具有生长速度快、产量高、外型美观、遗传稳定、抗逆性强等特点。

具体实施方式：

一.培养基与培养料的制备

培养基为PDA培养基。配方：去皮马铃薯200g煮汁，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 7。置于15×150mm小试管中，管口用硅胶塞塞住。