[发明专利]卡马西平致皮肤严重不良反应遗传检测

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种通过遗传检测控制卡马西平致皮肤严重不良反应风险的方法。

背景技术

癫痫是一种疾病和综合征，以脑部神经元反复突然过度放电所致的间歇性中枢神经系统功能失调为特征。在癫痫发作的治疗中，抗癫痫药物有特殊重要的意义。卡马西平(Carbamazepine，CBZ)是临床常用的一线抗癫痫药物，用于治疗口腔颌面部三叉神经痛、舌咽神经痛和癫痫发作。但CBZ在使用过程中易产生各种毒副作用，甚至危及生命，其中常见的是皮肤损害，约10％长期服用的患者易发生皮疹、湿疹、荨麻疹、皮肌炎、过敏性皮炎、剥脱性皮炎、中毒性表皮坏死松解症(Toxic epidermal necrolysis，TEN)、渗出性多形性红斑、红斑狼疮综合征和Stevens-Johnson综合征(SJS)等，严重皮肤反应的发生概率大约为1/10000，致死率达30％以上，其中SJS/TEN的致死率高达40％。因此，临床医生在应用CBZ前应特别慎重，在评估其致皮肤不良反应风险的基础上合理使用。

人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)系统，即人类主要组织相容性复合物(majorhistocompatibility complex，MHC)，位于人类第6号染色体短臂6p21.31，由一群紧密连锁的复等位基因位点组成，DNA片段长度约3600kb。HLA复合体结构十分复杂，是迄今为止所知最复杂的遗传多态系统，在启动和参与机体特异性免疫识别、免疫应答中发挥重要作用。HLA复合体已鉴定出224个基因座，其中能表达产物的功能性基因为128个，习惯上按HLA复合体在染色体上的排列分为3个区：I类基因区位于HLA复合体远离着丝粒一端；II类基因区位于HLA复合体近着丝粒一端；III类基因区位于二者之间。3个基因区含数十个基因座，分别称为HLA-I、HLA-II、HLA-III类基因(图2)。I类包括A、B、C经典基因和E、F、G、X、J、H非经典基因。HLA-B*1502是HLA基因B座位的1个基因亚型。到2009年HLA-B座位已有1000多种等位基因，其多态性主要位于HLA-B基因的第2、3号外显子。有报道HLA-B*1502与CBZ引起的Stevens-Johnson综合征/中毒性表皮坏死溶解症(CBZ-SJS/TEN)存在强相关性，而且是目前为止有关HLA标记与某一疾病的相关性中最强的。

研究表明HLA-B*1502阳性患者服用CBZ出现SJS/TEN的风险显著性增强，美国基础研发报告FDA建议如果患者有HLA-B*1502流行地区的血统，首次服用CBZ前应进行HLA-B*1502基因型检测，以减低抗癫痫药物的高风险性。目前在中国大陆地区均未见有关HLA-B*1502基因与CBZ-SJS/TEN的相关性报道。因此，开展该方面的研究，可以进一步完善CBZ导致的皮肤型药物不良反应与HLA-B*1502相关性研究，从而为临床个体用药提供参考依据。

发明内容

本发明提供一种通过遗传检测控制卡马西平致皮肤严重不良反应风险的方法。

通过采集受检者的口腔粘膜细胞，提取其基因组DNA，对其基因组DNA的HLA-B*1502等位基因型进行检测，从基因层面评估抗癫痫药物卡马西平致皮肤严重不良反应的风险，从而为临床个体用药提供参考依据。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。

实施例  检测试剂盒的使用

步骤1：DNA模板的抽取

用硅胶吸附法抽提口腔上皮细胞的基因组DNA。

步骤2：荧光定量PCR反应

使用检测试剂盒中的荧光定量PCR套装，进行荧光定量PCR反应，反应的体系为总体积10μl，包含浓度为20ng/μl的DNA模板2μl、1μl 10X荧光定量PCR反应缓冲液、0.1μl 25mM dNTP混合液、0.6μl 25mM MgCl₂溶液、0.025μl(5units/μl)Taq DNA聚合酶、20μM的有义引物和反义引物各0.225μl、10μM的带VIC荧光探针和带FAM荧光探针各0.25μl，去离子水5.325μl。

在PCR扩增仪上进行反应，反应条件为50℃、2分钟，95℃、10分钟，进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟。反应结束后在荧光定量PCR仪上读取样品荧光量。

步骤3：基因型分析