[发明专利]游离甲状腺素化学发光定量检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于体外临床检验和化学发光免疫法技术领域，具体涉及一种用于游离甲状腺素(FT4)定量检测试剂盒及相关制备方法和使用方式。

背景技术

甲状腺功能紊乱为内分泌疾病中最常见者，并至今仍易被漏诊。据美国对11个城市4.6万人的普查中发现，有约11％的人存在未被诊断出的各种甲状腺功能紊乱。甲状腺功能紊乱可分为甲状腺功能亢进症(hyperthyroidism，简称甲亢)和甲状腺功能减退症(hypothyroidism，简称甲减)。

甲状腺激素为甲状腺素(thyroxine，T4)和三碘甲状腺原氨酸(3，5，3’-triiodothyronine，T3)的统称，两者均为酪氨酸含碘衍生物。血浆中99％以上的T3、T4都和血浆蛋白可逆结合，主要与甲状腺素结合球蛋白(thyroxine binding globulin，TBG)结合，亦有部分和清蛋白、前清蛋白结合。仅有占血浆0.1％-0.3％的T3和0.02％-0.05％的T4是游离的，只有游离T3、T4才能进入靶细胞发挥作用。甲状腺功能亢进，医源性或中毒性甲状腺功能亢进TT4与FT4都升高；亚急性甲状腺炎或慢性淋巴细胞性甲状腺炎TT4、FT4一过性升高；各种原因所致TBG升高，如雌激素，肝炎等，也使TT4升高但FT4不升高。各种原因所致的甲低病例中，FT4均显著低于正常范围，但妊娠36周后，FT4呈正常生理性降低。

化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)于1977年问世，1985年第一代化学发光免疫试剂盒研制成功并投放市场。上世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫(RIA)和酶免疫(EIA)相似，不同之处是以发光物质作为底物，并藉助其自身的发光强度直接进行测定。

化学发光酶免疫分析是以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体)进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)，它们有各自的发光底物。HRP常用的底物为鲁米诺(3-氨基邻苯二甲酰肼，luminol)或其衍生物如异鲁米诺(4-氨基邻苯二甲酰肼)等，鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行，在过氧化物酶及活性氧的存在下，生成激发态中间体，当其回到基态时发光，其波长为425nm。发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。如果不使用增强剂，鲁米诺体系的发光基本上为闪光型且信号弱，通过加入某些特殊的增强剂可增强发光的信号并可大大延长发光的持续时间。

化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度(检测限度可达10^-15～10^-18mol/L)，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作，且测试中不使用有害的试剂。试剂保持期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。但是，国外的自动化学发光酶免疫分析仪及与之相匹配的试剂盒多采用封闭体系配合使用，价格昂贵，操作复杂，在国内不易推广。

发明内容

本发明将化学发光技术与免疫分析技术相结合，提供了一种能够定量检测游离甲状腺素(FT4)的试剂盒。

本发明技术方案如下：

一种游离甲状腺素化学发光定量检测试剂盒，包括反应板，酶结合物，发光底物，校准品，质控品，浓缩洗涤液，所述的反应板包被有抗FT4抗体。

所述的校准品以FT4纯品配制，浓度优选为0、2、8、40、80、120pg/ml。

所述的质控品以游离甲状腺素纯品配制，由质控品I和质控品II两部分组成，质控品I的浓度为0.3-39.5pg/ml，质控品II的浓度为40.5-118.5pg/ml。

所述的质控品I的浓度优选为3.79pg/m，质控品II的浓度优选为70.60pg/ml。

所述的酶结合物为HRP标记的FT4类似物，所述的反应板材质是不透明的聚苯乙烯或聚乙烯，所述的发光底物为鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物，所述的浓缩洗涤液是pH7.0-pH8.0的中性缓冲液。