[发明专利]淫羊藿次苷Ⅱ在制备抗黑色素瘤药物中的用途

说明书

技术领域：

本发明属药物制备领域。涉及淫羊藿次苷II的医药新用途，具体涉及淫羊藿次苷II在制备抗黑色素瘤药物中的用途。

背景技术：

黑色素瘤为一种临床常见肿瘤，常原发于皮肤、黏膜。临床实践观察显示，其恶性程度很高，易发生远处转移。其对放疗与化疗均不敏感，5年生存率很低。

从天然药物中筛选活性成分是黑色素瘤治疗的新方向。

淫羊藿次苷II少量存在于淫羊藿药材中，其化学结构式如下：

淫羊藿次苷II

目前有关淫羊蕾素的药理活性研究报道较少。中国专利CN200780034447.9公开了“淫羊藿次苷II在制备皮肤增白药物中的应用”。然而目前关于淫羊藿次苷II在制备抗黑色素瘤药物方面的用途尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供淫羊藿次苷II的新的药用用途，具体涉及淫羊藿次苷II在制备抗黑色素瘤药物中的应用。

本发明采用淫羊藿次苷II进行小鼠黑色素瘤细胞株(B16)和人黑色素瘤细胞株(A375、SK-MEL-2)干预实验，观察淫羊藿次苷II对细胞增殖抑制情况，细胞增殖抑制率＝〔1-(加药组OD平均值-调零孔OD平均值)/(空白对照组OD平均值-调零孔OD平均值)〕×100％。ICS干预时间均为24h，实验重复3遍以上。结果显示，1.淫羊藿次苷II体外可显著抑制B16、A375和SK-MEL-2细胞的增殖，明显促进其凋亡，增加P53蛋白磷酸化及caspace蛋白表达；2.淫羊藿次苷II可显著抑制荷B16小鼠皮下移植瘤体积。

实验结果证实，淫羊藿次苷II可有效抑制黑色素瘤。

本发明所述的淫羊藿次苷II可进一步加以合适的药学上可接受的载体制备抗黑色素瘤的药物。

本发明中，所采用的实验用细胞株为可市购生物材料。

本发明中，采用本领域已知的常规试验方法进行上述的小鼠黑色素瘤细胞株(B16)和人黑色素瘤细胞株(A375、SK-MEL-2)干预实验。

本发明的淫羊藿次苷II新的药用用途，为治疗黑色素瘤提供了一种新的途径和手段。

附图说明

图1是：淫羊藿次苷II(ICS)对三种黑色素瘤细胞株细胞增殖的影响，

其中，ICS浓度剂量为μM，检测方法为WST-8法，图1A为各浓度ICS对小鼠黑色素瘤细胞株B16细胞增殖抑制率的影响；图1B为各浓度ICS对人黑色素瘤细胞株A375细胞增殖抑制率的影响；图1C为各浓度ICS对人黑色素瘤细胞株SK-MEL的细胞增殖抑制率的影响。

图2为淫羊藿次苷II(ICS)对人黑色素瘤细胞株A375细胞凋亡的影响，其中，ICS浓度剂量为μM，检测方法为Annexin V和PI双染法流式检测，ICS干预时间均为24h。

图3为淫羊藿次苷II(ICS)对黑色素瘤细胞株A375P-P53和对人黑色素瘤细胞株A375 Caspace-3蛋白表达的影响，其中，图3A，ICS对人黑色素瘤细胞株A375P-P53蛋白表达的影响；图3B ICS对人黑色素瘤细胞株A375 Caspace-3蛋白表达的影响；ICS浓度剂量为μM，检测方法为Westernblot，ICS干预时间均为24h。

图4是淫羊藿次苷II(ICS)对荷B16黑色素瘤小鼠肿瘤体积的影响，

其中，DMSO为荷瘤对照，ICSM为淫羊藿次苷II 50mg/kg组，ICSH为淫羊藿次苷II 100mg/kg组，D为种瘤后天数；给药方式为腹腔注射，给药时间为每周3次，肿瘤测量时间为每周3次。

具体实施方式

实施例1淫羊藿次苷II抗黑色素瘤细胞株的体外实验

材料与方法

1、细胞株：小鼠黑色素瘤细胞株(B16)，购自中国科学院上海细胞库。人黑色素瘤细胞株(A375和SK-MEL-2)购自ATCC。上述细胞株用含有10％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、体积分数为5％CO₂、完全饱和湿度条件下常规培养，48h更换培养基，细胞生长达饱合状态时，用0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA消化传代，2～3d传代1次，实验选用对数生长期细胞。

2、细胞增殖的检测：