[发明专利]复合载体混合固定酵母菌发酵烟草下脚料制备乙醇的方法

权利要求书

1.一种复合载体混合固定酵母菌发酵烟草下脚料制备乙醇的方法，包括：

(1)将拉斯12号，1346，1578酵母分别接种于酵母种子培养基中，在30℃，150r/min条件下培养24h-36h，得到种子液；

(2)取10g聚乙烯醇、0.5g海藻酸钠和5g硅藻土，加入60ml蒸馏水浸泡24h-36h，之后在110℃下灭菌10min，冷却至40℃，制得复合载体；

(3)将步骤(1)三种酵母菌种子液与步骤(2)复合载体混合均匀，注射到含有1％CaCl₂饱和的硼酸溶液进行交联20h-22h，使用生理盐水和无菌水洗涤，得到固定化小球；

(4)将上述固定化小球接入增殖培养基中，30℃活化24小时，进行固定化酵母的增值培养；

(5)将上述增殖培养后的固定化小球以10％的接种量接入发酵培养基，在25℃-35℃、150r/min条件下发酵，即得。

2.根据权利要求1所述的一种复合载体混合固定酵母菌发酵烟草下脚料制备乙醇的方法，其特征在于：所述步骤(3)三种酵母菌种子液的体积比1∶1∶1。

3.根据权利要求1所述的一种复合载体混合固定酵母菌发酵烟草下脚料制备乙醇的方法，其特征在于：所述步骤(5)发酵培养基中烟草下脚料与双蒸水的固液比为1∶10，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L。

4.根据权利要求1所述的一种复合载体混合固定酵母菌发酵烟草下脚料制备乙醇的方法，其特征在于：所述步骤(5)发酵温度为35℃，时间为72h，固定化小球的填充率为15％，发酵液的pH值为3.5。