[发明专利]11个用于区分原发性肝癌癌组织及癌旁组织的microRNA标志物

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地，本发明涉及一类可用于区分原发性肝癌癌组织及癌旁组织的microRNA标志物以及用途。本发明还涉及检测所述microRNA标志物的芯片和试剂盒。

背景技术

原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，每年新发病例约占全球50％。肝癌的恶性程度高，发展迅速，治疗困难，病死率高。因此，肝癌的尽早诊断就愈发显得迫切。

任何事物的发生发展都处于内外因共同作用之下，内因为主，外因为辅。基因作为生命的遗传介质，在生物体的生、老、病、死中处于基础内因的地位。绝大部分基因通过转录生成核糖核酸，再翻译生成蛋白质而发挥生物学功能。

microRNA(miR或miRNA，微小RNA)是一类在较高等的真核生物体内广泛存在的，长度约18-26个碱基的单链RNA分子。它可以通过碱基配对原则特异性地与一些mRNA上的靶位点相结合，引起靶mRNA降解或翻译抑制，进而在转录后水平对靶基因进行调控。

microRNA来源于长度约为1000bp的长链RNA初始转录产物(Pri-miRNA)，Pri-miRNA分子在细胞核中经Drosha酶剪切形成长度约60～80nt的具有茎环结构的miRNA前体(Pre-miRNA)。Pre-miRNA转运至胞质后，被Dicer酶进一步切割成长约22nt的双链miRNA。双链miRNA解开后，成熟的miRNA进入RNA诱导基因沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)，与互补mRNA完全或不完全配对，降解靶mRNA或阻遏其表达。

尽管microRNA在细胞总RNA中所占的比重很小，但由于它可以高效地对所有具有靶位点的mRNA产生调控作用，microRNA在生物体的发育乃至肿瘤的发生、发展过程所起的作用仍不可小视。

然而，迄今为止，本领域对于与肿瘤(如肝癌)相关的microRNA了解甚少，因此本领域迫切需要进一步地分离各种microRNA，尤其是与肿瘤的发生、转移、复发或检测有关的microRNA。

发明内容

本发明的目的就是提供一类新的、可用于区分原发性肝癌癌组织及癌旁组织的microRNA标志物。

本发明的另一目的就是提供所述microRNA标志物的用途。

在本发明的第一方面，提供了一种分离的miRNA，所述的miRNA选自：

(i)序列如SEQ ID NO：n所示的miRNA，其中n为选自1-11的正整数；或

(ii)与SEQ ID NO：n所示序列互补的miRNA。

在另一优选例中，所述的miRNA分离自人。

在本发明的第二方面，提供了一种miRNA集(set)或组合(combination)，所述的集或组合由序列如SEQ ID NO：1-11所示的11种miRNA所构成。

在本发明的第三方面，提供了一种分离的或人工构建的前体miRNA，所述的前体miRNA能在人细胞内剪切并表达成本发明第一方面中所述的miRNA。

在本发明的第四方面，提供了一种分离的多核苷酸，所述的多核苷酸能被人细胞转录成前体miRNA，所述的前体miRNA能在人细胞内被剪切且表达成本发明第一方面中所述的miRNA。

在另一优选例中，所述的多核苷酸具有式I所示的结构：

Seq_正向-X-Seq_反向    式I，

式I中，

Seq_正向为能在人细胞中表达成所述的miRNA的核苷酸序列，

Seq_反向为与Seq_正向基本上互补或完全互补的核苷酸序列；

X为位于Seq_正向和Seq_反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq_正向和Seq_反向不互补，

并且式I所示的结构在转入人细胞后，形成式II所示的二级结构：

式II，

式II中，Seq_正向、Seq_反向和X的定义如上述，

||表示在Seq_正向和Seq_反向之间形成的碱基互补配对关系。

在本发明的第五方面，提供了一种载体，它含有本发明第一方面中所述的miRNA，或第四方面中所述的多核苷酸。