[发明专利]家蚕BmcecD1基因编码成熟肽在制备抗大肠杆菌或绿脓杆菌药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及家蚕(Bombyx mori)分子生物学研究领域，具体涉及家蚕Cecropins族抗菌肽的研究，尤其涉及家蚕Cecropins族中抗菌肽BmcecD1基因编码成熟肽在制备抗大肠杆菌或绿脓杆菌药物中的应用

背景技术

昆虫有极强的适应能力和防御能力，其中最重要的机制是对病原物质和有害侵染因素的非专一免疫体系，昆虫抗菌肽(Antibacterial peptides)，又称为昆虫抗微生物肽(Insect Amimicrobial Peptide，AMP)，作为昆虫体液非专一免疫反应机制的主要应答分子，显示对细菌、真菌具有广谱高效的杀灭作用，对病毒、原虫、非正常细胞(例如癌细胞)的抑制作用。

昆虫抗菌肽的杀菌机理主要通过对细胞膜的物理化学损伤、或对细胞膜电位的影响、或抑制细菌细胞壁的呼吸而达到抑菌效果，所以不易导致微生物产生耐药性，具有分子量小、热稳定、抗菌谱广、无免疫原性、对高等动物正常细胞无害等优点，可能成为替代抗生素的新型抗菌物质之一，所以近年来国内外对抗菌肽转基因抗病育种和生物制药(制剂)的应用研发非常活跃，迄今为止，已分离鉴定或发现了100多种具有免疫诱导活性的昆虫抗菌肽分子。

Cecropins族抗菌肽是一类研究比较深入的抗菌肽，从昆虫到脊椎动物均有文献报道，此族是目前已知天然抗菌肽中活性较强的一种，目前已从果蝇(Drosophila melanogaster)和疟蚊(Anopheles gambiae)等双翅目和鳞翅目的昆虫中分别发现了数目不等的Cecropins基因家族成员。

Cecropins族抗菌肽为一类分子量约为4kD，由40个氨基酸残基(aa)组成的碱性耐热短肽，有A、B、C、D、E、F和G等多种同系物类型，其中以惜古比天蚕的Cecropin A1-A3、B、D为典型代表。

2004年西南大学完成了对家蚕基因组的全测序和框图绘制工作(Xia etal.，2004.Science，306：1937-1940)，为家蚕抗菌肽基因的研究提供了9×基因组数据库和EST数据库(silkworm knowledgebase：http://silkworm.genomics.org.cn/)。

家蚕Cecropins族抗菌肽BmcecD1基因已有文献报道(Yang J，Furukawa S，Sagisaka A，Ishibashi J，Taniai K，Shono T，Yamakawa M.cDNA cloningand gene expression of cecropin D，an antibacterial protein in the silkworm，Bombyx mori，Comp.Biochem.Physiol.B Biochem.Mol.Biol.1999，122：409-414.)和GenBank登录(NM_001043368)，但目前尚未有关于该基因的成熟肽分子以及成熟肽分子进行活性研究的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供家蚕Cecropins族中抗菌肽BmcecD1基因所编码的成熟肽分子——抗菌肽BmcecD1在制备抗大肠杆菌或绿脓杆菌药物中的应用。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

家蚕BmcecD1基因属于家蚕Cecropins家族，从现有技术以及本发明人对Cecropins家族的研究可以看出，该家族中很多成员都具有抗菌肽活性。

家蚕BmcecD1基因已经被公开报道，其核苷酸序列在GenBank的登录号为NM_001043368，本发明人对该基因进行注释分析，得到该基因编码成熟肽BmcecD1的33个氨基酸序列，如SEQ ID NO：1所示。

家蚕抗菌肽BmcecA2(成熟肽)分子、家蚕抗菌肽BmcecB1(成熟肽)分子和家蚕抗菌肽Cecropin D(成熟肽)分子，这三个是已经证实具有抗菌活性的。

本发明以家蚕抗菌肽BmcecA2(成熟肽)分子、家蚕抗菌肽BmcecB1(成熟肽)分子和家蚕抗菌肽Cecropin D(成熟肽)分子作为试验对照，对上述获得的家蚕BmcecD1基因编码成熟肽BmcecD1进行抗菌活性研究。