[发明专利]鸭疫里默氏杆菌、大肠埃希氏杆菌二联灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，更具体是涉及一种鸭疫里默氏杆菌、大肠埃希氏杆菌二联灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里氏杆菌(Riemerellaanatipestifer，RA)引起的急性或慢性接触性、败血性传染病。鸭大肠埃希氏菌病(Escherchia coli)是由致病性大肠杆菌引起的出血性、渗出性和败血性的传染病。不同品种、天龄及性别的鸭群均可感染发病，而且这两种病通常混合并发感染。鸭发生传染性浆膜炎后，往往继发鸭大肠埃希氏菌病，导致鸭群大批死亡，给养殖场造成严重的经济损失。

鸭传染性浆膜炎又称为鸭疫里默氏杆菌病是目前造成养鸭业经济损失的最主要传染病之一，在全球范围内大多数有集约化养鸭生产的国家和地区均有本病发生，在我国几乎所有养鸭区都有发生。本病的发病率在5％-100％，死亡率通常为5％-70％或更高，鸭的易感天龄为10-30天。使用疫苗进行免疫接种是控制该病的有效措施，但鸭疫里默氏菌血清型众多，到目前为止，共报道有21个血清型(1-21型)，各血清型之间又没有交叉保护，这就要求使用疫苗的抗原血清型必须与生产中流行菌株的血清型一致。

鸭大肠杆菌病是由鸭埃希氏大肠杆菌引起的各种天龄鸭的急性败血性细菌病，以心包炎、气囊炎、肝周炎、腹膜炎为主要特征，在鸭群中常与鸭疫里默氏杆菌病伴发。鸭埃希氏大肠杆菌有O₈、O₁₅、O₁₉、O₇₃、O₇₈等多个血清型普遍存在。

发明内容

本发明提供一种可以有效预防鸭疫里默氏杆菌、大肠埃希氏杆菌的二联灭活疫苗的制备方法。

本发明的鸭疫里默氏杆菌、大肠埃希氏杆菌二联灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：

(1)种子液的制备，将鸭疫里默氏杆菌、大肠埃希氏菌基础种子分别接种于相应的培养基中进行培养，得到种子液；

(2)制苗用菌液的制备，在相应的培养基中接入步骤(1)得到的种子液进行培养得到；

(3)灭活，将步骤(2)得到的制苗用菌液进行灭活；

(4)疫苗的制备，在步骤(3)得到的灭活菌液中加入油佐剂等辅料，乳化分装，得到疫苗成品。

优选地，所述鸭疫里默氏杆菌疫苗株为I型和II型。

优选地，所述大肠埃希氏菌为O₇₈型。

优选地，所述鸭疫里默氏杆菌的培养基为特制胰酶大豆培养基。特制胰酶大豆培养基的制备方法如下：胰蛋白胨，10g；大豆蛋白胨，10g；酵母浸出干粉，5g；葡萄糖，2g；NaCl，5g；调节pH值为7.4±0.2，补足水份至1000mL，分装后于121℃高压灭菌20min，置4℃冰箱备用，使用前加入适量的无菌鸭胚浸出液。制备TSA固体培养基时，在其中另外加入琼脂粉15g，同样高压灭菌，冷却至适宜温度，加入适量的预先温育的无菌鸭胚浸出液。无菌操作倒入灭菌平皿中，制成平板，室温凝固后，倒置4℃冰箱备用。

优选地，所述大肠埃希氏菌的培养基为改良马丁肉汤培养基。改良马丁肉汤培养基的制备方法如下：改良马丁汤(pH 7.4±0.2)，牛肉汤500ml，猪胃消化液500ml，NaCl 2.5g。上述成分混合后，以NaOH调节pH值为7.4±0.2，煮沸20-40分钟，补足水份至1000ml，冷却沉淀，抽取上清液，经滤纸过滤，滤液应为澄清，淡黄色。按需要量分装后，于116℃高压灭菌30min，置4℃保存备用，用前加入0.03-0.06％的无菌辅酶。制备改良马丁固体培养基时，在其中另外加入琼脂粉15g，加热熔化后，分装到小试管中，高压灭菌。或分装到三角瓶中高压灭菌后，冷却到适宜温度加入0.03-0.06％的无菌辅酶并混匀后制备平皿，室温凝固并无菌检验合格后，置4℃保存备用。

为了更完善本发明的鸭疫里默氏杆菌、大肠埃希氏杆菌的二联灭活疫苗的制备方法，在步骤(1)得到种子液后和步骤(2)得到制苗用菌液后都还包括检验提纯的步骤。

优选地，所述步骤(3)中是用甲醛溶液灭活菌液。

在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(4)中制备出的疫苗为油乳剂灭活疫苗。

本发明还提供一种用上述制备方法制备而来的鸭疫里默氏杆菌、大肠埃希氏杆菌二联灭活疫苗。