[发明专利]一种基于雄激素受体介导原理的检测环境类雄激素毒性当量的ELISA试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及环境类雄激素检测领域，具体涉及一种基于雄激素受体介导原理的 检测环境类雄激素毒性当量的ELISA试剂盒。

技术背景

随着工业污染加剧，环境内分泌干扰物成为继工业革命带来的煤烟污染及汽车 工业带来的光化学烟雾污染之后的第3代环境污染物，将对人类健康产生重要影响。 环境类雄激素(environmental antiandrogen，EA)就是这样一类重要的环境内分泌干扰 物质，他们可模拟体内天然的雄激素，与雄激素受体(androgen receptor，AR)竞争 性结合，阻止体内雄激素与AR的结合，充当AR拮抗剂，从而抑制雄激素活性， 发挥类雄激素作用，动物胚胎期暴露可导致生殖器官发育不全或缺失(特别是副 睾)、外生殖器畸形(尿道下裂)、隐睾、肛门与生殖器距离缩短等生殖毒性和畸形。 目前报道的EA主要涉及一些非甾体药物如氟他胺(flutamide，FLU)、非那雄胺 (finasteride，FIN)，农药中的杀虫剂、杀菌剂和除草剂及其代谢产物，如合成除虫菊 酯类(pyrethroids)、DDT的代谢产物p，p′-DDE、甲氧滴滴涕(methoxychlor)、杀菌利 (procymidone)、烯菌酮(vinclozolin，V)及其代谢产物M₁和M₂等。

因为环境类雄激素以痕量的形式存在于污水、土壤等环境中，其检测常常受到 诸多限制，成为近年来研究热点之一。

传统的检测方法中多以GC和GC-MS法作为检测EA的标准方法。但由于EA通常 以痕量混合物的形式存在，各种物质化学性质差异很大，且环境中存在着大量化学 物，采用传统的萃取富集、高效液相色谱/质谱/气相色谱等方法分离出单一成分并 测定含量，其分析手段复杂、操作繁琐、费时费力、设备昂贵、需要专门高级训练， 并且很难达到所有痕量成分的完全解析；虽然免疫学技术检测灵敏度和通量较高， 但仅能检测具备特异抗体的部分物质；而传统的受体结合试验因为需要放射性同位 素标记而使其应用受到了很大的限制。所以必须探索快速、高通量、灵敏度高且重 复性好的廉价筛选方法。

实际上，评估痕量混合物的综合生物学效应及累加毒性当量(TEQ)更有意义。 目前基于受体配体结合的筛选方法，既可以反映EA的结合量，又能综合反映EA的类 雄激素样累加毒性当量，且易于实现高通量，是最近几年EA高通量筛选和监测的新 方向。Gaido等(GaidoK W，et al.Toxicol Appl Pharmacol，1997，143(1)：205-212) 采用重组酵母测评体系评价环境类雄激素诱导的酵母细胞内结合效应，但此方法检 出在μM～nM水平，灵敏度和准确性尚不理想。

经典雄激素受体信号转导理论认为，内源性雄激素作为配体与雄激素受体结合 后，受体发生二聚体化变构并暴露DNA结合区，使特异的DNA序列即雄激素效应元 件(Androgen response elements，ARE)与之结合，刺激靶基因转录，表现出各种 生理效应(Foradori C.D.，et al.FrontNeuroendocrinol.2008；29(2)：169-181)。ARE的 核心序列为5′-GGAACAnnnTGTATC-3′(n为任意核苷酸)。环境类雄激素，也 即EA，主要以与内源雄激素如双氢睾酮(DHT)类似的形式，通过AR介导而产生相 应的病理性效应。基于此雄激素受体介导原理可检测环境类雄激素的综合累加毒性 当量。

发明内容

本发明的目的是提供一种廉价、快速、高通量的基于雄激素受体介导原理的检 测环境类雄激素毒性当量的ELISA试剂盒。