[发明专利]克伦特罗免疫原、包被原及其在胶体金试纸中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种克伦特罗免疫原、包被原，属于免疫学技术领域。

背景技术

随着全球经济一体化和食品贸易国际化，食品安全已成为全球重要的公共卫生问题。农产品和动物性产品中的化学残留物，对人体具有明显的急慢性毒性，包括癌症和染色体突变等特殊毒性，直接危害国民的身体健康及生命。这些药物的大量使用对生态和畜禽健康也构成直接威胁。食品安全问题不仅危害人民的身体健康、影响国际贸易、造成经济上的重大损失，严重的还将导致社会的不稳定。随着我国加入WTO，我们的畜禽产品和水产品的国际贸易将迎来更加激烈的竞争环境。就养殖业而言，我们的动物产品的总体质量水平与发达国家相比仍有一段差距，基本的食品安全还不能完全得到保证；现在兽药不仅用来防治动物疾病，而且越来越多的药物用于促进生长等非治疗用途，由此而伴随产生的食品动物组织及产品中药物残留对公众健康和环境的潜在危害也日趋严重。为保障人类的健康，保护环境卫生以及保障我国的正常出口贸易，控制兽药在动物性食品中的残留问题已成为我国的当务之急。

克伦特罗(瘦肉精)作为一种兽药残留，20世纪80年代被广泛应用到畜禽生产中，用来提高瘦肉率，近年来畜产品中克伦特罗的残留对人类健康造成的危害和对生态食物链所造成的破坏已经引起高度的重视。人如果食用含有克伦特罗过量的肉品，就会出现心跳加快、血压升高、心悸、头痛、恶心、呕吐、手颤等症状，严重者出现抽搐、晕厥，对患有高血压、心脏病、甲亢、前列腺肥大的患者危害更大。特别是最近几年来更是引起人们的特别关注，农业部、国家质检总局等部门发文严令禁止在动物生产中使用克伦特罗。但是国内有些地区还在非法使用克伦特罗，并发生多起中毒事件。我国近些年来的“瘦肉精”事件更是屡有发生，如1999年10月6日，浙江省嘉兴市57人中毒；2001年11月7日，广东河源发生大规模中毒事件，有747人中毒；就在2006年的9月中旬，上海发生数十人瘦肉精中毒事件，这些事件无不刺激着人们本来就十分敏感的食品安全神经。

为此，研究建立简便、可靠、快速、灵敏的残留分析方法，开发快速筛选及定量检测克伦特罗残留的方法和试剂，对检测和控制动物性食品中的兽药残留，确保动物性食品的安全，提高我国动物食品的质量，增强我国动物食品在国际、国内市场上的竞争力，促进我国养殖业稳定、健康发展以及保障我国人民的消费安全，促进国际贸易，具有十分重要的战略意义。

克伦特罗是小分子化合物，常用的检测方法有高效液相色谱分析法(HPLC)，气相色谱/质谱联用分析法(GC/MS)或液相色谱/质谱联用分析法(LC/MS)。这些方法普遍存在着仪器昂贵，方法复杂，操作烦琐，试剂消耗量大的局限性。20世纪80年代兴起的胶体金免疫层析检测，基于免疫学检测原理，操作简单快捷、结果清晰易于判断、无需复杂的实验技能和设备，特别适于现场检测。能够在第一时间检测水产品中克伦特罗残留，对遏制克伦特罗的非法使用具有重要意义。但是目前市面上的克伦特罗胶体金速测产品存在检测限无法满足国家限量要求的现状。解决此问题在于以下两个途径：(一)改善抗体质量和竞争物。而改善抗体质量还在于优化免疫原结构；(二)改善包被原结构，从而从竞争物的角度优化抗原抗体识别。

发明内容

针对上诉问题，本发明提供了一种克伦特罗免疫原、包被原，该免疫原、包被原能极大提高克伦特罗胶体金速测的灵敏度。

本发明的另一个目的是提供该免疫原、包被原在胶体金试纸生产中的应用。

上述克伦特罗免疫原的制备包括以下步骤：

(1)克伦特罗半抗原的合成；

(2)克伦特罗半抗原活泼酯的合成；

(3)克伦特罗半抗原活泼酯于血蓝蛋白进行偶联；

(4)免疫原的纯化；

(5)免疫原蛋白浓度的确定，分装。

所述的半抗原具有式(I)所示结构：

所述的免疫原具有式(II)所示结构：

上述克伦特罗包被原的制备包括以下步骤：

(1)克伦特罗半抗原的合成；

(2)克伦特罗半抗原活泼酯的合成；

(3)克伦特罗半抗原活泼酯于人血清蛋白进行偶联；

(4)包被原的纯化；

(5)包被原蛋白浓度的确定，分装。

所述的包被抗原具有式(III)所示结构：

发明通过以下途径应用于克伦特罗胶体金试纸的生产：

(1)将克伦特罗免疫原免疫试验动物生产克伦特罗抗体；

(2)胶体金颗粒的制备；

(3)胶体金标记克伦特罗抗体；