[发明专利]磺胺二甲嘧啶胶体金检测卡及其生产和使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种磺胺二甲嘧啶胶体金检测卡，属于免疫学技术领域。

背景技术

磺胺二甲嘧啶(英文名：Sulfamethazine)，曾被广泛应用于兽医临床以治疗细菌性传染病，其亚治疗浓度又可作为畜禽的饲料药物添加剂，以控制某些动物性疾病、提高饲料的转化率和促进动物的生长发育。但因长期使用，其在动物性食品中残留现象十分严重，可导致人的过敏反应、诱导耐药菌株的产生、影响机体免疫系统、破坏人体造血机能等，且可诱发人的甲状腺癌。美国FDA、欧盟、中国农业部等规定在肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中磺胺类药物的含量不能超过100ng/g(ppb)，在牛奶中磺胺类药物的含量不能超过100ng/g(ppb)。但是违法添加时间仍然时有发生。2002年中国出口至日本的鳗鱼被检出磺胺二甲嘧啶超标。2006年12月辽宁省抚顺市在全市动物产品抽查检查中也发现多种饲料因含有磺胺二甲嘧啶而违反国家规定。

磺胺二甲嘧啶是小分子化合物，常用的检测方法有高效液相色谱分析法(HPLC)或液相色谱/质谱联用分析法(LC/MS)。这些方法普遍存在着仪器昂贵，方法复杂，操作烦琐，试剂消耗量大的局限性。20世纪80年代兴起的胶体金免疫层析检测，基于免疫学检测原理，操作简单快捷、结果清晰易于判断、无需复杂的实验技能和设备，特别适于现场检测。而国内外尚无该技术监控磺胺二甲嘧啶的报道。

发明内容

针对上诉问题，本发明提供了一种磺胺二甲嘧啶胶体金检测卡，该快速诊断卡检测快速、准确、稳定。

本发明的另一个目的是提供该胶体金检测卡的应用。

上述磺胺二甲嘧啶胶体金检测卡的制备包括以下步骤：

(1)磺胺二甲嘧啶半抗原的合成

(2)磺胺二甲嘧啶免疫抗原的合成；

(3)磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的制备；

(4)胶体金颗粒的制备；

(5)胶体金标记磺胺二甲嘧啶单克隆抗体；

(6)样品垫的制备，该垫附置一段胶体金标记磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的膜；

(7)磺胺二甲嘧啶包被抗原的合成；

(8)磺胺二甲嘧啶固相硝酸纤维素膜的制备，该膜包被一条含磺胺二甲嘧啶包被抗原的检测带和一条包被羊抗鼠IgG的质控带；

(9)样品垫的处理：选择适当的封闭试剂、表面活性剂和(或)非离子型去污剂单独或以适当比例组合后均匀浸于玻璃纤维素膜，室温干燥备用；

(10)组装磺胺二甲嘧啶胶体金检测卡，该检测卡用PVB作为背衬，在PVC衬板的中部叠置硝酸纤维素膜，两端分别叠置吸水垫和样品垫，硝酸纤维素膜和吸水垫、样品垫相搭连。

所述的半抗原具有式(I)所示结构：

所述的免疫抗原具有式(II)所示结构：

所述的包被抗原具有式(III)所示结构：

发明通过以下操作步骤进行牛奶或尿液中磺胺二甲嘧啶检测：将30μl液态奶或尿液加入到加样孔中，放置5-10分钟内观察结果。

发明通过以下操作步骤进行饲料中磺胺二甲嘧啶检测：

(1)称取待测样品2.5g放入50ml带盖离心管中，然后加入提取液7.5ml盖紧盖子充分混匀3min。

(2)3000转/分离心5分钟，或用滤纸过滤上清到滤瓶中待检。

(3)用移液器取样品液30μl滴入加样孔中，放置5-10分钟内观察结果。

发明通过以下操作步骤进行动物组织或蜂蜜中磺胺二甲嘧啶检测：

(1)取适量动物组织，用匀浆机匀浆2min，称取1±0.05g匀浆物(蜂蜜直接称取)置15ml离心管中，加入10ml二氯甲烷混合，剧烈振荡10min。3000g以上速度离心10min。

(2)取5ml移另一15ml离心管中，50℃水浴用氮气吹干。加入1mL水复溶。

(3)用移液器从水相中取样品液30μl滴入检测孔中，放置5-10分钟内观察结果。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：价格便宜，检测费用低廉，检测速度快，整个检测过程只需要10-15分钟，操作简单，无需专门仪器，肉眼观测结果，结果稳定，能满足食品安全、屠宰、饲料、检测机构的检测要求，更方便于现场检测。

附图说明

图1磺胺二甲嘧啶胶体金检测卡检测示意图

其中：

1为观测窗

2为加样孔

3为质控带

4为检测带

图2磺胺二甲嘧啶胶体金检测卡结构图

其中

5为样品垫