[发明专利]针对RMP基因的siRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学与生物医药技术领域，具体涉及一种针对RMP基因的RNA干扰技术。

背景技术

RMP(RPB5-Mediating Protein)最早是1995年Cheong等^[8]采用Far-Westing blotting方法，以³²P标记的重组人RPB5探针从人肝癌细胞株HepG₂的cDNA文库中筛查得到，其基因定位于人染色体19q12；它是RNA聚合酶II(RNAPII)第5亚基RPB5的调节蛋白(参见：Delgerma L，Hayashi N，Dorjsuren D，et.al.Mol Cell Biol，2004，24(19)：8556-8566.)。

发明人之前参与了对RMP的原始研究工作(参见：Molecular and CellularBiology 18：7546-7555，1998)；并发现了RMP对基因转录的抑制作用依赖于转录因子TFIIF，阐明了RMP与转录因子TFIIF的结合是RMP对转录抑制作用所必须的条件(参见：Cell Research 2003，13(2)111-120；Mol Cell Biol.2006，26(1)：250-60；Acta Physiologica Sinica.2006 58(6)：521-528)，为RMP在肝癌细胞中的功能研究奠定了坚实的基础。

目前，对于RMP的研究主要集中在分子机制水平，例如：RMP作为RPB5的调节蛋白，可以通过与后者的特异性结合调节RNAPII的转录活性，抑制多种基因的转录表达；特别是RMP能抑制HBx蛋白对多种相关顺式作用元件的激活，HBx蛋白则在HBV感染宿主细胞导致癌变过程中发挥重要作用，而HRx蛋白具有诱导癌细胞的功能，RMP可拮抗HBx蛋白(参见：①Delgerma L，Hayashi N，Dorjsuren D，et.al.Mol Cell Biol，2004，24(19)：8556-8566.②Dorjsuren D，Lin Y，Wei W，et al.Mol Cell Biol，1998，18(12)：7546-7555.)。

从线虫到人的RMP基因是高度保守的，人及鼠的多种组织中均可检测到不同水平的RMP mRNA，提示RMP具有重要的生物学意义。RMP拮抗HBx蛋白对基因转录的激活作用，以及RMP/URI调控细胞周期和维持DNA的稳定性的功能均提示RMP与肿瘤，尤其与肝癌具有重要联系。但由于目前对人类RMP的功能研究非常有限，还不清楚RMP与肿瘤发生、发展的关系及其对肿瘤细胞生物学功能的影响。

发明内容

本发明目的是提供一种针对RMP的siRNA。

为达到上述目的，本发明具体技术方案是，一种针对RMP的siRNA，所述siRNA的正义链序列为：5′-GGA UUU GCU AGC UGA UAA ATT-3’，反义链为：5’-UUU AUC AGC UAG CAA AUC CTT-3′。

上述siRNA经Blast Search检索确认与RMP以外的人类已知基因序列无同源性；使用前将互补的RNA链进行退火获得双链RNA分子。

siRNA是一种短片断双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA。

上述siRNA干扰的靶序列位于RMP基因的mRNA编码序列的第484到502个碱基之间，即5′-GGA UUU GCU AGC UGA UAA A-3′。

本发明的另一目的是提供所述针对RMP的siRNA的应用。

上述针对RMP的siRNA在制备治疗肝癌的药物中的应用。

本发明的实施例中，应用上述针对RMP的siRNA抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长，具体包括以下步骤：

(1)转染前24小时将SMMC-7721细胞制成细胞悬液，以4×10⁵个/每孔接种于6孔板，置37℃、5％CO₂培养箱，转染时细胞应达到40％～70％的融合度；

(2)转染液的制备：按照每一孔用量：A液：用无血清RPMI1640培养基稀释6μl上述针对RMP的siRNA至250μl；B液：用无血清RPMI1640培养基稀释5μl Lipofectamine至250μl；轻轻混合A、B两液，室温放置30min；