[发明专利]展青霉素固相萃取柱

说明书

技术领域：

本发明涉及一种固相萃取柱的制备方法，特别是一种以pvpp和Florisil混合基质填充的针对展青霉素净化的固相萃取柱(SPE)。

背景技术：

展青霉素(patulin)是一种有毒的真菌代谢产物，在自然界分布广泛，主要污染水果及其制品，尤其是苹果、山楂、梨、番茄、苹果汁、山楂片等。毒理学试验表明，展青霉素具有生育、致癌和免疫等毒理作用，同时它也是一种神经毒素。在大多数欧美国家展青霉素的限量标准为0～50μg/kg；WHO推荐展青霉霉素在苹果汁中的最高限量标准为50μg/kg；我国相应的标准规定苹果、山楂半成品限量标准为100μg/kg，果汁、果酱、果酒、罐头、果脯的限量标准为50μg/kg。展青霉素对人、畜危害较大，因此受到了世界各国的广泛关注。

展青霉素的检测属于痕量分析，样品前处理至关重要，其直接关系到结果的准确性和可靠性。目前展青霉素的检测方法主要包括薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法和色谱联用技术等。样品提取溶剂主要是乙酸乙酯，乙腈或乙腈和水的混合液。提取液的纯化主要采用无水碳酸钠、C₁₈固相萃取柱、亲水亲脂平衡柱、串联PVPP-C₁₈柱、Mycosep多功能柱等净化方法。薄层色谱法，样品处理步骤繁琐，需双向展开，甲苯在体内不易代谢，对人体危害巨大，且色谱干扰严重，重现性差，回收率低，已不适于当前要求。目前已有行业标准NY/T1650-2008采用液相色谱法测定展青霉素含量。主要采用228 AflaPat多功能柱对样品进行净化，该法简单、快速、灵敏、准确。但该多功能柱价格昂贵且依赖于进口。而C₁₈固相萃取柱、亲水亲脂平衡柱、串联PVPP-C₁₈柱等都操作相对复杂，而且对样品也有局限性，效果却难以达到228 AflaPat多功能柱的效果。气相色谱法和色谱联用技术由于其突出灵敏度已受到越来越多的重视，但对杂质同样灵敏，杂质的干扰更严重，从而影响液相测定结果。所以对样品的前处理净化效果要求更高，一种好的净化柱将直接决定测定方法的可行性。因此很有必要制备出功能与228 AflaPat多功能柱功能相当的或更好的固相萃取柱，以替代228 AflaPat多功能柱。目前固相萃取柱的填充基质品种繁多，各自的作用机理又各不相同，针对的样品也千差万别。228 AflaPat多功能柱的填料为多种基质的混合体，作用模式主要为分子筛和专属性吸附。所以替代柱的填充基质的筛选和互相的搭配及各自的搭配比例成为替代柱制作成功的关键。

发明内容：

本发明为了克服上述存在的问题，从大量的填充基质中筛选出了pvpp和Florisil混合的填充基质，制备出了功能与228 AflaPat多功能柱相当的展青霉素固相萃取柱。主要针对的净化样品有苹果及其制品和山楂汁等。

一种pvpp和Florisil混合基质的固相萃取柱，其特征在于所述：固相萃取柱的填料基质为pvpp和Florisil，填装量可根据具体样品适当加减。

两者的比例取值范围+∞～0。

固相萃取柱基质需混合均匀。

pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱的制备方法，包括如下步骤：(1)固相萃取柱空管的底部放入一聚乙烯筛板，(2)填入一定量的pvpp和Florisil混合基质，干法装柱，(3)再在填料上部放一聚乙烯筛板，(4)将填料适当压紧，筛板不应歪斜，SPE柱制作完成。

所述的pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱使用前应用甲醇、水或乙腈预处理。

所述的pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱预处理后应以氮气吹干。

所述的pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱与228 AflaPat多功能柱相比，具有以下的几大优点：(1)成本大大降低，只相当于228 AflaPat多功能柱价格的十分之一左右。(2)填充基质减少为2种，更有便于柱的制作和柱稳定性的控制。(3)制作简单，即可实验室自制，也适于大生产。(4)样品的提取，溶剂的选择与228AflaPat多功能柱一至。

所述的pvpp和Florisil混合基质填充的固相萃取柱与228 AflaPat多功能柱相比，具有以下的几点不足：(1)柱使用前需要进行预洗。(2)洗后需对柱子进行氮气吹干。

附图说明：