[发明专利]抗边缘无浆体MSP5蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及单克隆抗体，尤其涉及一种抗边缘无浆体MSP5蛋白的单克隆抗 体，本发明还涉及分泌该抗MSP5蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，属于细胞工 程领域。

背景技术

无浆体病，旧称边虫病，是由立克次体目(Rickettsiales)、无浆体科 (Anaplasmataceae)、无浆体属的边缘无浆体(Anaplasma marginale)、中央无 浆体(A.centrale)和绵羊无浆体(A.bovis)等种寄生于红细胞内所引起的血液 性原虫病，主要以吸血类节肢动物(蜱类、牛虻、厩蝇、蚊子等)传播，是蜱传 播病中分布最广的一种(Ristic M.Bovine anaplasmosis.Parasitic Protozoa，edited by Kreier J P，1977，(IV)：235-249)。1910年和1911年首 次在北非发现了边缘无浆体和中央无浆体。此后发现无浆体病在世界各地广泛 流行，其中边缘无浆体的危害最大，它在急性病程中常引起动物严重贫血、体 重下降、高烧、流产、产奶量下降，甚至死亡。在我国部分省市也开展了该病 的流行病学调查，证实了存在不同程度的感染(何德肆，李海辉，欧阳叙向等.湖 南省部分地区牛无浆体病感染情况调查[J]，中国草食动物，2009，29 (1)：41-43)。

边缘无浆体具有一个完整的环形基因组，约1.2-1.6Mb，利用 SIGNALP(version3；ref18)软件预测出163个含有信号肽的CDSs，由 TMPRED(http://ch.embnet.org/software/TMPRED)软件推测出每三个CDSs就包 含一个跨膜区。由于PSORT(http://psort.nibb.ac.jp/form.htmL)和 PSORTB(http://psort.org/psortb/index)各自仅仅能够预测出43和13个外膜 蛋白(OMPs)，缺少许多已知的无浆体外膜蛋白，所以各个蛋白位置还无法推测 (Brayton K A，Kappmeyer L S，Herndon D R，et al.Complete genome sequencing of Anaplasma marginale reveals that the surface is kewed to two superfamilies of outer membrane proteins[J].Proc Natl Acad Sci U S A. 2005，102(3)：844-849)。边缘无浆体MSP1超家族主要由MSP1组成。MSP1是 表面暴露的异侧性复合物，由105ku和100ku的多肽聚合而成，各自被命名为 MSP1a和MSP1b(Barbet A F，Palmer G H，Myler P L et al.Characterization of an immunoprotective protein complex of Anaplasma marginale by cloning and expression of the gene coding for polypeptide Am105L[J].Infect Immun. 1987，55：2428-2435)。边缘无浆体MSP2超家族主要包括MSP2、MSP3和MSP4， 位于具有表面暴露区的外膜，MSP2和MSP3是免疫显性蛋白而且抗原性是可变的， 无浆体能够在牛体内产生持续感染主要是因为MSP2和MSP3容易发生变异而逃 避宿主免疫反应(Simpson C F.Morphologic alterations of Anaplasma marginale in calves after treatment with oxytetracycline[J].Am J Vet Res，1975，(36)：1443-1446；Tettelin H，Saunders N J，Heidelberg J，et al.Complete genome sequence of Neisseria meningitidis serogroup B strain MC58[J].Science.2000，287(5459)：1809-1815)。边缘无浆体MSP5是由633bp 单拷贝基因编码19ku的蛋白，在所有无浆体不同种(包括边缘无浆体，羊无浆 体和中央无浆体)之间相当保守，适合作为诊断抗原(Duzgun A，Schuntner C A，Wright I G，et al.A sensitive ELISA technique for the diagnosis of Anaplasma marginale infections[J].Vet Parasitol，1988，29：127.)。