[发明专利]检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的抗体

说明书

技术领域

本发明涉及生化领域，具体涉及检测病毒的试剂。 

背景技术

猪繁殖与呼吸综合症(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)是以母猪的繁殖障碍、仔猪及成猪的呼吸道症状为主要特征的一种病毒性传染病，其高死亡率在世界范围内给养猪业造成巨大的经济损失。自1987年在美国某个猪场发现PRRS以来，该病先后席卷整个北美、欧洲及亚洲。1990-1991年间该病在欧洲暴发流行，5000多个猪场发现本病，100多万头猪死亡。我国自1995年从加拿大引进种猪后，年底于华北地区爆发PRRS，1996-1998年更是出现“流产风暴”，发病母猪流产率达10-50％，母猪的死亡率高达10％。由于没有有效的防治手段，PRRS在我国愈演愈烈，并于2006年出现严重疫情，26省300多个县，379.8万头猪发病，死亡99.2万头，给养猪业带来沉重打击。PRRS爆发的原因在于其病毒复制过程存在变异，一般的疫苗难于预防，早发现，早隔离成为预防爆发流行的主要手段。 

经研究表明引起PRRS的病原体为猪繁殖于呼吸综合症病毒(Porcine Reproductive andRespiratory Syndrome Virus，PRRSV)，属于尼多病毒目(Nidovirales)动脉炎病毒科(Arteriviridae)动脉炎病毒属(Arterivirus)。PRRSV的基因组为不分节段的单股正链RNA，直径约40-80nm，大约为15kd，含9个开放读码框(ORFs)。病毒上的囊膜蛋白是病毒的结构和保护性抗原的组成部分，在致病和免疫过程中发挥着重要的作用。根据序列分析及血清学试验结果，将PRRSV分为两个亚型，即美洲型(代表株：VR-2332)和欧洲型(代表株：Lelystad Virus，LV)。PRRSV存在较大的基因变异，造成二者抗原性的差异也较大，因此两个亚型在血清学试验中很少有交叉反应。引起我国PRRS大规模暴发流行的主要是美洲型，流行病学调查发现我国亦存在欧洲型PRRSV。随着病毒基因组的变异，抗原决定簇的改变或转换，PRRSV的侵袭力和致病性可能还会不断增强，对养猪业将造成更大的威胁。 

对猪繁殖与呼吸综合症做出快速、准确诊断，及时有效掌握PRRSV的流行特点和监测其高致病毒株的出现，对流行趋势做出预测，尽早隔离并做出相应的防范，将能够最大限度地减低疾病所造成的危害。 

PRRS病毒的检测方法主要有病毒分离鉴定、免疫过氧化酶技术及RT-PCR检测等。病毒分离培养是最确切方法，但很多猪场不能开展，而且费时；RT-PCR检测技术含量及成本较高，同时易出现假阳性结果；抗体检测方法以美国IDEXX和法国LSI最为经典，由于目前各猪场均使用PRRS疫苗预防，上述两种方法都很难区分是疫苗免疫产生的抗体还是猪感染PRRSV 所产生，易出现假阳性；另外有些猪可能感染PRRS病毒但尚未产生抗体或曾感染过而现在血清转阴等，出现假阴性。 

PRRSV基因组ORFs7编码的核衣壳蛋白(Nucleocapsid Protein，NP)包含所有PRRSV毒株保守的共同抗原决定簇，又有具欧洲型和美洲型特异性的抗原决定簇。同时NP在病毒粒子中含量较高，约占病毒总蛋白的40％，具有极强的免疫原性。该蛋白是一种能够早期检测PRRSV感染的有效标志，及早确诊PRRSV感染，以便于快速采取有效的治疗和隔离措施，是防止PRRSV感染的扩散及降低死亡率的前提，也是减少经济损失的有效措施，而目前在国际上尚未有核衣壳蛋白抗原的检测方法。为此我们利用基因工程技术，表达该PRRSV核衣壳蛋白，并制备抗该蛋白的单克隆抗体，在此基础上构建双抗体夹心ELISA法检测PRRSV中的N蛋白，此抗原检测方法对于PRRS的早期诊断、预防PRRS的爆发流行、疫苗评测以及流行病学调查具有重要意义。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是提高检测PRRS病毒的灵敏度和特异性。 

本发明解决上述问题的技术方案是： 

一种检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测抗体，该抗体由保藏号为CCTCC NO.C200851的杂交瘤细胞株G2C51A2分泌得到，记为单抗G2C51A2。 

一种检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的捕获抗体，该抗体由保藏号为CCTCC NO.C200850的杂交瘤细胞株V1C12A1分泌得到，记为单抗V1C12A1。