[发明专利]H5型或H7型禽流感病毒的检测方法有效

专利信息
申请号: 200910160184.7 申请日: 2005-10-26
公开(公告)号: CN101613700A 公开(公告)日: 2009-12-30
发明(设计)人: 峰川晴美;纳富继宣;米川俊广;富田宪弘;葛原阳子;小田切孝人 申请(专利权)人: 荣研化学株式会社;国立感染症研究所所长代表的日本国
主分类号: C12N15/11 分类号: C12N15/11;C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
代理公司: 上海专利商标事务所有限公司 代理人: 冯 雅
地址: 日本*** 国省代码: 日本;JP
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摘要:
搜索关键词: h5 h7 禽流感 病毒 检测 方法
【说明书】:

本发明专利申请是国际申请号为PCT/JP2005/019710,国际申请日为2005年10月26日,进入中国国家阶段的申请号为200580037605.7,名称为“H5型或H7型禽流感病毒的检测方法”的发明专利申请的分案申请。 

技术领域

本发明涉及H5型或H7型禽流感病毒的检测方法,更具体涉及用于检测H5型或H7型禽流感病毒的寡核苷酸引物、使用该引物的H5型或H7型禽流感病毒的检测方法、流感的诊断方法及用于诊断流感的试剂盒。 

背景技术

流感是流行性的病毒性呼吸器官传染病,患病者具有从婴幼儿到老年人的广阔年龄层,常常是致命的。目前,感染禽类而形成问题的H5型禽流感病毒原来不感染人类。但是,1997年在香港发现了对人的感染,该次流行中18名患者的6名死亡。所幸之后没有再发现对人的感染,但进入2004年,在泰国和越南发现了对人的感染,在泰国有8人死亡,在越南有16人。 

高致病性禽流感病毒除H5型之外,还有H7型,H7型根据其序列大致分为欧洲型和美洲型。2003年在荷兰流行时报告有1人死亡,在美国2003年至2004年也报告了H7型禽流感病毒的流行。 

目前,禽流感病毒的检测使用人A型流感病毒快速诊断试剂盒。但是,所感染病毒的亚型的鉴定需要分离的病毒的抗原分析和基因检测等更加详尽的分析。 

可以获得可靠的结果的采用病毒分离培养的诊断由于需要数日,因此无法进行快速的诊断。可以比病毒分离更快速地进行诊断的方法有若干种,其中的RT-PCR法被认为与其它方法相比检测灵敏度更高。但是,对于目前公开的RT-PCR法,有报道称其与病毒的感染价相比无法以高灵敏度检出病毒,即使采用RT-PCR法的检查中呈阴性,也不能排除禽流感的感染。因此,希望出现可以迅速且高灵敏度地检出H5和H7型禽流感病毒的检查法。 

专利文献1:欧洲专利申请公开第1310565号说明书 

专利文献2:日本专利公表2004-509648号公报 

非专利文献1:Lau LT.等,Biochem.Biophys.Res.Commun.,vol.313,p.336-342(2004) 

非专利文献2:Shang S.等,Biochem.Biophys.Res.Commun.,vol.302,p.377-383(2003) 

非专利文献3:Collins RA.等,Biochem.Biophys.Res.Commun.,vol.300,p.507-515(2003) 

非专利文献4:Lee MS.等,J.Virol.Methods,vol.97,p.13-22(2001) 

非专利文献5:Munch M.等,Arch.Virol.,vol.146,p.87-97(2001) 

发明的揭示 

为了解决上述课题,本发明人认真研究后发现,制作与对H5或H7型禽流感病毒特异性的碱基序列杂交的寡聚核苷酸引物,通过LAMP(环介导恒温扩增,loop-mediated isothermal amplification)法扩增对H5或H7型禽流感病毒特异性的碱基序列,可以高灵敏度地检出H5或H7型禽流感病毒,从而完成了本发明。 

即,本发明提供以下的(1)~(8)。 

(1)根据选自以序列编号1表示的H5型禽流感病毒的血凝素碱基序列的693位~959位的碱基序列的任意碱基序列或与其互补的碱基序列设计的寡核苷酸引物。 

(2)如(1)所述的寡核苷酸引物,其中,包含选自以下的(a)~(c)的寡核苷酸: 

(a)选自以序列编号2~7表示的碱基序列或与其互补的碱基序列的至少含有连续的15个碱基的寡核苷酸; 

(b)可与前述(a)所述的寡核苷酸在严格条件下杂交的寡核苷酸; 

(c)包含前述(a)或(b)所述的寡核苷酸中的1个~数个的碱基被置换、缺失、插入或添加的碱基序列,具有引物功能的寡核苷酸。 

(3)如(1)或(2)所述的寡核苷酸引物,其特征在于,从H5型禽流感病毒的血凝素的目标核酸上的3′末端侧选择记作F3c、F2c、F1c的碱基序列区域,从5′末端侧选择记作B3、B2、B1的碱基序列区域,将各自的互补碱基序列记作F3、F2、F1和B3c、B2c、B1c时,由选自以下的(a)~(d)的碱基序列构成: 

(a)在3′末端侧具有目标核酸的F2区域,在5′末端侧具有目标核酸的F1c区域的碱基序列; 

(b)具有目标核酸的F3区域的碱基序列; 

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