[发明专利]HPPCn抗体、反义核苷酸及其干涉RNA在肿瘤诊断和治疗中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学、蛋白质学、肿瘤学领域，具体而言涉及针对HPPCn的单克隆抗体、反义核苷酸、干涉RNA及其衍生物的制备以及它们在肝癌诊断和治疗中的应用。

背景技术

Hepatopoietin PCn(HPPCn)是吴祖泽等从人胎肝cDNA文库中克隆的一个肝再生因子，能够特异的促进肝细胞增殖和部分肝切除小鼠的肝脏再生[Cui CP等人，Isolation and Functional Identification of a Novel Human Hepatic Growth Factor：Hepatopoietin cn，Hepatology，2008，47(3)：986-995]，对四氯化碳引起的急性肝损伤和肝纤维化具有保护作用[Cui CP等人，Protective role of Hepatopoietin Cn on liver injury induced by CCl4/Ethanol in rat，Hepatology Research，2009，39(2)：200-6]。

HPPCn是富含亮氨酸酸性核蛋白(LANP)家族成员之一，LANP蛋白是一类多功能的酸性核蛋白，其成员包括pp32，PP32r1，PP32r2等。以往的研究显示这些蛋白在细胞的信号转导、蛋白质降解、细胞骨架动力学以及细胞的形态发生等过程中参与作用[Malek SN等人，Identification and preliminary characterization of two related proliferation-associated nuclear phosphoproteins.J.Biol.Chem 1990；265(22)：13400-13409.Opal P等人，Generation and Characterization of LANP/pp32 Null Mice，Mole Cell Biol；24(8)：3140-9]，特别是pp32常被作为一种抑癌蛋白而备受关注。

HPPCn作为LANP家族的一个新的成员，其在肿瘤发生发展中的作用还没有深入的研究。申请人的研究发现HPPCn在肿瘤细胞，特别是肝癌细胞中的含量明显高于正常细胞。且HPPCn本身能够明显促进肿瘤细胞的生长和迁移。

发明内容

本发明首次发现Hepatopoietin PCn(HPPCn)在肿瘤细胞中的含量远高于正常细胞，通过检测HPPCn蛋白、DNA或RNA的表达可以有效地诊断肿瘤的发生。本发明还发现，HPPCn是肿瘤细胞生长的主要活性因子，通过下调HPPCn的表达或抑制HPPCn的活性，能够使肿瘤细胞的生长和迁移受到抑制，而不影响正常细胞的生长和迁移，从而达到抗肿瘤的目的。本发明公开了HPPCn单克隆抗体的制备以及HPPCn相关的检测方法，可以作为制备肿瘤早期诊断试剂的主要成分和方法。本发明还公开了能够有效抑制HPPCn在肿瘤细胞中表达的干涉RNA、反义核苷酸及其衍生物，以及可以抑制HPPCn生物活性的中和抗体，它们可以作为制备抗肿瘤药物的活性成分，具有非常广泛的临床应用价值。

因此，本发明首次提出以HPPCn为标志物的肿瘤检测和诊断方法和通过抑制HPPCn表达和活性达到肿瘤治疗目的的理论，并公开了能够特异抑制HPPCn表达的干涉RNA和反义核苷酸以及能够抑制HPPCn活性的中和抗体的制备，为人类战胜恶性肿瘤提供了一种新的思路。

本发明一方面涉及与HPPCn表达相关的检测方法，包括利用酶联免疫吸附、免疫组化、PCR，Northern Blot，Western Blot等方法检测HPPCn蛋白，DNA或RNA在肿瘤细胞或血清中的表达。

本发明另一方面涉及能够下调HPPCn在肿瘤细胞中表达的反义核苷酸、干涉RNA或携带上述序列的载体及其衍生物。

本发明再一方面涉及一种药物组合，其含有本发明所述以HPPCn为靶的反义核苷酸、干涉RNA或携带上述序列的载体药物及其衍生物，它们可以作为制备抗肿瘤药物的活性成分。

本发明再一方面涉及HPPCn的中和抗体及其相关的药物组合，他们能够抑制HPPCn的活性，从而抑制肿瘤细胞的生长，可以作为制备抗肿瘤药物的活性成分。

附图说明

结合附图举例说明本发明，不构成对本发明的限制。