[发明专利]卡介菌多糖核酸制备过程中透析新工艺

说明书

技术领域

本发明涉及卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析工艺，特别涉及到将卡介 菌提取液中苯酚去除，采用中空纤维透析器透析除酚。

背景技术

卡介菌多糖核酸(BCG Polysaccharide and Nucleic)具有调节人体的 免疫功能、主要用于预防和治疗慢性支气管炎、感冒、哮喘。

现有的卡介菌多糖核酸原粉制备全过程是培养基制备、接种、培养、收 菌、破菌、提取、透析、精制和制备干粉。其中透析除酚这道工序，直接关 系到原粉的质量以及对员工的劳动保护，是至关重要的。目前国内生产厂家 一般采用这种经典的、原始的透析袋方法透析。

现有的卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析袋方法是：将破菌后的提取液 灌入透析袋内，扎紧袋口，放入装有纯化水的容器内，进行静置透析，透析 途中需定时换纯化水，直至透析外液即纯化水中用三氯化铁定性测定苯酚， 测不出苯酚即透析完毕，透析时间大约需要72小时。然后再进入下一步工序， 最后制得卡介菌多糖核酸原粉。更重要是由于透析袋法操作，手工灌袋近距 离接触苯酚，人体皮肤易受伤害，而透析柱法不必人员直接操作，这样就避 免了人体受伤害的可能。

发明内容

本发明提供了卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析工艺，采用中空纤维透 析柱进行透析，将提取液中苯酚去除，获得卡介菌菌体内的多糖和核酸。

卡介菌多糖核酸原料提取过程是：培养基制备-接种-培养-收菌-破 菌-离心-透析-醇沉-精制干燥-制备原粉。

卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析工艺为：

透析的具体操作步骤是：透析器有内液与外液两个通道，需要透析的液 体是走内液通道，能去除杂质的纯化水是走外液通道，内通道的流向必须是 由下而上，而外通道的流向是由上而下。首先取离心上清液，集中倒入一容 器内，该容器内液体必须高于透析器的高度，这样可以利用位差将液体通过 透析柱时能自下而上逆流而出，采用调节阀来控制流速，以每分钟20毫升恒 定流量。同时开启透析柱外液通道，将纯化水接入，自上而下流出，每分钟 流量控制在600～800毫升左右，内液与外液流速比为1∶30～40，外液流速的 调节是根据内液流出不含苯酚为准。

测定方法：取2毫升透析内液，加一滴10％三氯化铁试液摇匀，透析液不得 出现紫色反应，说明不含苯酚。然后收集不含有苯酚的流出液。一批料透析 时间约为4小时，透析完毕，制备的透析液进入下一道工序，最后制得卡介 菌多糖核酸原粉。

本发明由于改变了透析方式，即采用中空纤维透析柱透析，在不增加任何 赋形剂，且透析的原理未改变的情况下，最后制备的原粉中酚残留和杂蛋白 明显减少，从而使质量提高并完全符合检验标准，工作时间从72小时缩短至 4小时，操作工从3人减至为1人，同时改善了员工的劳动保护，生产成本也 下降。

然而我公司现有的制备工艺，将提取液直接通过中空纤维透析柱，自下而 上逆流透析，1分钟后流出的透析内液即不含苯酚了，整批提取液通过透析柱 透析时间只需4小时左右。根据用高效液相法定量测定残留苯酚，获得数据 分析，透析袋比透析柱法液体中酚残留多4-5倍，由此可见用透析柱法得到的 原粉质量更好，生产时间大幅度缩短，成本下降。

实施例1

将6公斤菌体加40升纯化水破菌，再加40升苯酚萃取，最后可获得提取 液25升。然后把提取液倒入不锈钢容器内，再把不锈钢桶放到高位槽上，利 用位差将提取液接入透析柱的内管下口，液体自下而上逆流而出，用三氯化 铁测定透析内液的结果来控制流速，同时纯化水进入透析柱外管上口，自上 而下流出，带走提取液中的苯酚。整个透析时间为4小时，透析完毕，制备 的透析液进入下一道工序，最后制得卡介菌多糖核酸原粉。

比较实施例1