[发明专利]生产免疫细胞的方法及诱发产生免疫作用细胞的方法

说明书

技术领域

本发明系有关于一种产生免疫细胞的方法，尤指用于产生抗疱疹病毒之免疫细胞的方法。

背景技术

1964年Achong与Barr等人首次在伯奇氏淋巴瘤病人细胞中分离并发现艾普斯坦-巴尔二氏病毒(Epstein-BarrVirus，EBV)，中文名称为「人类疱疹病毒第四型」(Human herpesvirus-4，HHV-4)，属于疱疹病毒科线型双股DNA病毒。

EBV像大多数的疱疹病毒一样有两种生活史：细胞裂解时期(Lytic phase)和潜伏期(Latent phase)。其中，细胞裂解时期多发生在上皮细胞，因为病毒会在细胞内大量复制，最后导致细胞破裂，释出大量的病毒。而潜伏期多发生在B淋巴球，EBV藉由镶嵌在B淋巴球的基因体中，以逃避免疫细胞的攻击，同时也有机会造成淋巴球不正常增生而引起癌化与其它慢性感染症状，例如「伯奇氏淋巴瘤」、「胃腺癌」、「鼻咽癌」、「何杰金氏病」、「T淋巴瘤」、「淋巴球增生性疾病」、「艾滋病相关淋巴癌」与「移植后淋巴球增生疾病」。

从分子生物学及EBV结构研究发现，近100个病毒基因会在细胞复制的过程中被表现出来，然而只有10个基因会在被潜伏感染的B细胞(latently infected B cells)表现出来，其中包含有两种未转译RNA(例如EBV-encoded RNA；EBER)、6种核蛋白(例如核蛋白-1(EBV nuclear antigen-1，EBNA1)及核蛋白-3c(EBV nuclear antigen-3c，EBNA3c)与两种膜蛋白(包含潜伏性膜蛋白-1(latent membrane protein-1；LMP1)及潜伏性膜蛋白-2(latent membrane protein-2；LMP2))。在不同潜伏期的病毒会表现不同的蛋白质，这些病毒蛋白亦会在上述恶性肿瘤细胞中大量表现。

目前现行治疗EBV相关感染疾病的治疗上，除了外科手术与放射线治疗外，有传统的抗病毒药物(例如acyclovir)与抗肿瘤用药物，及新兴的抗体药物(例如Gp350vaccine；Rituximab)。然而前述药物都无法突破血脑障壁(blood-brain barrier；BBB)，亦即无法经由体循环(systemic circulation)而到达脑部感染部位，此外，即使这类抗病毒药物有效抑制EBV增生，但是病患往往无法负荷药物所产生的副作用因而降低或停止用药，以致于无法有效治疗。

目前对于移植受者之疱疹病毒的感染主要是使用抗病毒试剂进行先行性治疗或预防治疗。然而，这些药理学方式具有其限制，诸如药物毒性、抗药性的发生、不佳的口服生物可利用性(oral bioavailability)以及低效力等问题。死亡率在即使已利用抗病毒试剂治疗之情况下仍然偏高，特别是于疗程中未尽早开始治疗。此外，当病患长期使用这些试剂，对于抗病毒试剂的抗药性会逐渐产生。

为克服前述传统药物所具有的缺点，具有专一性高、副作用低、不易产生抗药性，以及可个体化等优点的免疫疗法便应运而生。现有针对疱疹病毒感染疾病之免疫疗法是使用以活病毒为基础的疱疹病毒抗原来源(herpes virus antigen sources based on live virus)、经疱疹病毒感染的细胞(herpes virus-infected cells)、疱疹病毒基因表现载体(hepresherpes virus gene expression vector)或者合成的疱疹病毒蛋白或肽，藉以活化对疱疹病毒有专一性免疫反应的抗原呈现细胞(antigen presenting cells)，希望藉由已活化的抗原呈现细胞可以在活体外(ex vivo)或活体内(in vivo)刺激个体产生对EBV有专一性的毒杀型T细胞(CTL)及细胞免疫反应。实验证实，在曾经感染EBV且有血清反应的人体(非急性感染)主要系藉由第一型主要组织兼容复体(MHC class I)的毒杀型T细胞控制EBV，故EBV专一毒杀型T细胞也经常可以从曾经感染过EBV个体的周边血液中发现。此外，潜伏性膜蛋白1及潜伏性膜蛋白2抗原专一性的毒杀型T细胞在体外试验中也已经被证实可以有效的毒杀藉由第一型主要组织兼容复体表现这两种抗原细胞株。但是使用病毒或经病毒感染的细胞作为抗原来源，会有病毒污染以及导致感染的潜在风险；而使用全长疱疹病毒基因或蛋白质作为抗原来源则又有诱发免疫抑制作用(immune suppression)或免疫耐受性(immune tolerance)的问题。

发明内容