[发明专利]一种生物样品中蛋白质组的分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物样品中蛋白质组分析方法，特别是一种鉴定不同生物 样品中特异表达蛋白组的分析方法，更确切的说，涉及到鉴定肿瘤细胞产生的 特异表达蛋白的方法，属于生物医药领域。

背景技术

目前在大、中城市里，医院门诊部所见到的癌症病人，一般说来，早期(I 期)病人约占5％～10％，中期(II期)约占20％，较晚期的病人(III+IV期) 约占70％～75％。较晚期病人治疗后的5年生存率只有10％～30％。从60年代 至今，我国一些医务人员和科研人员在不同的癌症高发区、高危人群中展开了 癌症的初筛、普查普治，发现了许多早期病人，早期癌症病人约占普查发现癌 症总数的30％～70％。早期癌症病人正规治疗后的5年生存率高达70％-95％。

对癌症控制的策略是预防为主，防治结合，重在三早，三早是指早期发现， 早期诊断和早期治疗。只有这样，才能以较少的投入，获得较好的控制癌症的 效果。早期得到诊断的癌症病人住院治疗，在肿瘤体积小、没有发生转移的情 况下，患者的自身免疫功能良好，往往在手术切除即可治愈，住院治疗时间短， 花费的医疗费用少。但当较晚期才确诊的癌症病人，需要应用综合治疗，治疗 时间长，医疗费用高，而且治疗效果差。

所以，肿瘤治疗的关键在于早期发现和早期治疗。目前认为：能在CT、MRI 下观察到的占位性病变已算不上最早期，当然也不是治疗的最佳时期。应该从 细胞生物学角度看癌变，并做到早期诊断，才能够将肿瘤扼杀在细胞萌芽期或 肿瘤形态可见的最早期。

由于不论是细胞的正常功能还是病理特性都在一定程度上取决于细胞所表 达的蛋白质功能。因此，鉴定细胞内表达的蛋白质组的区别，可用于诊断疾病， 并可用于药物开发和疾病治疗。而要进行蛋白质组表达和功能的差异化分析， 要求能够达到分辨细胞内分子的复杂混合物的程度。但细胞内许多物质往往以 微量存在，目前用于分析蛋白的方法在上述各方面都有局限，用这些常规手段 难以进行定性鉴定和定量分析。

目前，一种常用的蛋白质分离的方法是凝胶电泳。通常是用凝胶内等电点 聚焦先分离蛋白质组，再用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 进行第二次分离。结果得到一张根据等电点范围(净电荷)和大小(质量)来 区分蛋白质的图。但是该方法存在以下几方面的局限。首先，该方法只能根据 蛋白质分子质量和等电点(pI)对蛋白质分子进行区分；其次，各维度的分辨率 受到凝胶分辨能力的限制，通常很难区分质量差异小于5％或等电点相近的生 物分子。第三，凝胶的容量和灵敏度都有限，可能无法检测出少量和微量表达 的生物分子。第四，无法观察到分子量低于约10～20kDa的小肽。

目前临床诊断疾病的一般方法是要求特异性地检测出疾病的已知标记。但 是，制备特异性结合标记并且能在复杂的混合物中鉴别出标记的试剂需要大量 时间，因此阻碍了此类诊断方法的发展。

用质谱的方法测定蛋白质组是较新的方法，如申请号为03148375.5、名称 为用于生物样品分析的蛋白指纹法的专利，涉及用滞留层析法捕获蛋白质组进 行分析的蛋白指纹法。采用质谱法进行鉴别检测蛋白质组，分析所得数据的形 式是可用计算机读取的条码格式(蛋白指纹)。该发明的方法可用于细胞和临 床疾病的诊断，如肿瘤的诊断。

申请号为200610140288.8、名称为“用磁珠支持基质及质谱判断正常人与 肝癌的试剂盒和方法”的专利申请，涉及一种用磁珠支持基质的方法捕获生物 样品中肝癌蛋白质组，用磁性分离器分离磁珠及样品，无需离心样品，然后用 质谱法进行分析的蛋白指纹分析。

专利号为ZL03148375.5、名称为“用于生物样品分析的蛋白指纹法”的专 利，涉及用滞留层析法捕获蛋白质组进行分析的蛋白指纹法。

但是以上专利由于其反应条件的设计使其敏感性即早期检出率仍然有待于 提高。

发明内容

本发明的发明目的在于提供一种生物样品中蛋白质组的分析方法，该方法 具有更高的敏感性即早期检出率。

本发明的又一发明目的在于提供一种鉴定生物样品中特异表达蛋白的分析 方法，特别是在肿瘤形态不可见或可见的情况下，检测血液或体液中癌细胞产 生的独特的蛋白质组的方法。

本发明的再一发明目的在于提供一种根据上述方法的原理制备的试剂盒。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：