[发明专利]桔梗活性部位的制备、应用及质量控制检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域和色谱检测方法，具体涉及桔梗活性部位的制备及新化合物的提取分离方法及化学结构鉴定；桔梗活性部位在抗肿瘤药物中的应用；高效液相色谱法测定桔梗提取物及活性部位中的单体皂苷含量的方法。

背景技术

桔梗Platycodon grandiflorum(Jacq.)A.DC为桔梗科植物多年生草本植物，其药用部位为根，为我国常用的四十种中药之一，广泛分布于我国，朝鲜半岛和日本，桔梗性味苦、辛、平，归肺经，有开宣肺气，祛痰排脓之功效。常用于外感咳嗽、咳痰不清、咽喉肿痛、胸闷腹胀、痢疾腹痛、血淤水肿、癃闭等症，为常用中药。国内外研究表明，桔梗中有效成分为桔梗皂苷，桔梗具有抗炎、祛痰、保肝、降血糖、抑制脂肪吸收、抗氧化、抗菌等广泛的药理作用。桔梗作为一种药食两用的植物，无毒副作用，因此其具有广阔的开发前景。目前国内外对桔梗总皂苷在抗肿瘤方面的研究为一片空白。

目前，对桔梗的质量控制多以桔梗皂苷为研究指标。2005版《中国药典》采用重量法测定桔梗中总皂苷的含量，规定药材中总皂苷含量不得低于6％，该方法操作繁琐，测量误差较大，重现性差。目前国内对桔梗单体皂苷的含量测定，多以桔梗皂苷D为指标成分。桔梗中皂苷成分种类较多，同一样品中各单体成分的含量差异较大。采用单体皂苷对桔梗皂苷进行质量分析，作为评价桔梗质量或进行良种选育的指标，缺乏整体性和科学性。同时，国内外在对桔梗皂苷D的含量测定中，桔梗皂苷D与桔梗皂苷D₂未完全分离，导致其含量测定的不准确(朱丹妮，郅慧，高山林.HPLC-ElSD法测定桔梗中桔梗皂苷D的含量.植物资源与环境学报，2001，10(4)：11-13.张振凌，杨海玲，张红伟等.炮制对桔梗不同饮片中桔梗皂苷D含量的影响.中成药，2008，30(4)：554-556.郭丽，肖永庆，张村等.桔梗药材中桔梗皂苷D的定性定量方法研究.北京中医药大学学报，2007，30(3)：200-209.黄樱，史春蕾，刘墨祥等.HPLC-ELSD法测定桔梗饮片中8种桔梗皂苷的含量.扬州大学学报(自然科学版)，2008，11(4)：41-43.)。

本发明通过对桔梗总皂苷的系统研究，药理筛选发现桔梗总皂苷对多种癌细胞具有显著的抑制作用，在此基础上，又对桔梗总皂苷中单体成分进行了研究，分离得到了桔梗皂苷D、远志皂苷D₂、桔梗皂苷D₃、去芹菜糖桔梗皂苷D₃、桔梗皂苷D₂、去芹菜糖桔梗皂苷D₂、去芹菜糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E及两种新的三萜皂苷，并利用分离得到的八种单体皂苷建立定量分析方法。

发明内容

本发明的目的之一是提供安全有效毒副作用低的抗肿瘤效果显著的中药活性部位，并提供一种制备方法。

本发明目的之二是提供一种具有抗肿瘤活性的药物，以桔梗提取物和可药用辅料组成。

本发明目的之三是对桔梗活性部位中单体成分进行研究，以期寻找抗肿瘤活性强的单体皂苷。

本发明目的之四是提供两种新的桔梗皂苷化合物(化合物A，化合物B)。

               R₁      R₂

化合物A        Glc-    Glc-

化合物B        Glc-    Xyl-

本发明的目的之五是提供制备这两种化合物(化合物A，化合物B)的方法。

本发明的目的之六是提供三种全面的准确的控制桔梗提取物及活性部位的质量控制检测方法。

本发明的技术方案依此包含如下方法步骤：

1、桔梗活性部位的制备

(1)、将桔梗生药粉碎后，用3-5倍水或含水有机溶剂回流或超声提取；每次回流提取时间为1-3小时，超声提取时间为0.5-2小时，提取液减压浓缩得浸膏；

提取中所用含水有机溶剂是指含不同量的水的甲醇、乙醇、异丙醇等。

(2)、将步骤(1)中所得浸膏用去离子水将浸膏溶解，采用3-10倍有机溶剂萃取；弃去有机溶剂层，将水层减压浓缩，除去有机溶剂。

所用有机溶剂指乙酸甲酯、乙酸乙酯、石油醚、汽油等。

(3)、将步骤(2)所得水溶液通过大孔树脂，用去离子水洗脱至流出液无色，采用不同浓度乙醇梯度洗脱，收集50-95％乙醇洗脱液，减压浓缩，完全去除乙醇和水，得桔梗提取物。

不同浓度乙醇指50-95％的乙醇；大孔树脂指AB-8或D-101型树脂。

所得桔梗活性部位中可测总皂苷成分应大于50％